7.3. Практическая часть

Приборы, реактивы, посуда: колбы для приготовления сред, химические стаканы на 100 мл, стеклянные шпатель, термометр, набор минеральных солей, глюкоза, пробирки.

7.3.1.Методика выполнения работы

Приготовить среды для получения накопительных культур:

1.среда для анаэробов (среда Виноградского). Состав среды, г глюкоза - 0,2,K₂HPO₄ – 0,1, ,MgSO₄ – 0,05, NaCl – 0,05, MnSO₄ , FeSO₄ - следы , CaCO₃ – 2,0, вода – 100 мл. Среду налить в пробирки, закрыть ватными пробками, внести небольшое количество почвы и пастеризовать 10 минут при температуре 80°С. Затем поставить пробирки в термостат при температуре культивирования 30°С.

2. накопительная культура аэробных спорообразующих бактерий. Нарезать клубень картофеля на мелкие ломтики, поместить их в колбу, добавить на кончике шпателя мел, залить небольшим количеством воды, закрыть ватной пробкой и прогреть на кипящей водяной бане в течение 15 минут. Вегетативные клетки и споры большинства бактерий, находящихся на поверхности клубней картофеля погибнут. Жизнеспособными останутся только споры бактерий Bacillus. Температура культивирования 30°С.

7.3.2. Оформление работы.

Написать отчет о проделанной работе.

2. Контрольные вопросы.

1. Что такое накопительная культура?

2. В чем заключается сущность метода накопительных культур?

3. Какие особенности микроорганизмов учитывают при получении накопительных культур?

4. По каким признакам судят о получении накопительной культуры?

Рекомендуемая литература

[1] c.61-75, [2] c.106-114

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 8.

ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ ПРИЗНАКИ МИКРООРГАНИЗМОВ.

8.1. Цель работы: приобретение навыков обнаружения физиолого-биохимических свойств микроорганизмов.

2. Общие сведения

При изучении физиолого-биохимических признаков микроорганизмов исследуют: отношение их к источникам углерода и азота, продукты жизнедеятельности, накапливающиеся в среде (кислоты, спирты, газы), отношение к кислороду, щелочам и другим факторам внешней среды, способность продуцировать антибиотические вещества, в ряде случаев определяют чувствительность микроорганизмов к тем или иным антибиотикам.

Для обнаружения физиолого-биохимических свойств бактерий пользуются посевом их на дифференциально-диагностические среды (жидкие и плотные), содержащие вещества, в отношении которых микробы способны проявлять свою химическую (ферментативную) активность. Результат реакции определяется при помощи добавляемых в питательную среду различных индикаторов, дающих в большинстве случаев цветные реакции. Поэтому метод посева на дифференциально-диагностические среды получил название посева на «пестрый ряд».

8.3. Практическая часть

При использовании микроорганизмами источников углерода, в частности углеводов, продуктами их жизнедеятельности нередко бывают газы, кислоты и спирты. Для обнаружения газов применяют посев уколом в агаровую среду в пробирки. При появлении газов столбик агар-агара разрывается. Используют также жидкую среду с перевернутыми вверх дном поплавками. Поплавок представляет собой небольшую узкую пробирку (0,5×3-4 см). Его опускают вверх дном в обычную пробирку с жидкой средой, которая при стерилизации заполняет поплавок. При развитии микроорганизмов, образующих газы, последние вытесняют жидкость из поплавка.

Образование кислот при посеве на средах, содержащих углеводы, устанавливают при помощи индикатора бромтимолблау, а их количество – по титрованию 0,1 н. раствором щелочи. При наличии мела кислоты связываются в кальциевые соли, которые можно обнаружить добавлением к 5 мл среды 1 мл концентрированного раствора оксалата аммония. В присутствии кислот (например, уксусной) выпадает белый осадок.

Образование спирта определяют при отгоне части субстрата с последующей пробой на спирт (реакция на появление йодоформа).

Продуктами жизнедеятельности микроорганизмов на доступных источниках азота часто бывают : аммиак (проба с реактивом Несслера), сероводород и меркаптан (проба с фильтровальной бумагой, смоченной ацетатом свинца), индол (проба с азотистой кислотой), нитрит (проба с цинк-йод-крахмалом в кислой среде). Редуктазную способность культур выявляют обесцвечиванием метиленового синего.

Приборы, реактивы, посуда: колбы для приготовления сред, химические стаканы на 100 мл, стеклянные шпатель, термометр, набор минеральных солей, глюкоза, пробирки.