4.3.1.2. Оформление работы.

Рассмотреть под микроскопом и зарисовать в тетради споры бактерий. Написать отчет о проделанной работе.

3. Контрольные вопросы.

1. Как происходит образование спор у бактерий?

2. Чем вызвано образование спор у бактерий?

3. Какие типы спорообразования вам известны?

Рекомендуемая литература

[1] c.44-61,[2] c.62-71

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 5

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ДЛЯ МИКРООРГАНИЗМОВ.

1. Цель работы: приобретение навыков приготовления питательных сред для культивирования микроорганизмов.

2. Общие сведения

При составлении питательных сред необходимо учитывать потребность микроорганизмов в элементах питания. По составу среды подразделяют на естественные (натуральные) и синтетические.

Состав натуральных сред очень сложен и непостоянен, существенно колеблется в зависимости от сырья и способа приготовления сред. Это заметно влияет на рост микроорганизмов. Естественные среды используют главным образом для поддержания культур микроорганизмов, накопления их биомассы и диагностических целей.

Синтетические среды содержат в своем составе известные химически чистые вещества в строго указанных концентрациях. Синтетические среды широко используются для исследований, связанных с изучением обмена веществ микроорганизмов.

Существуют также полусинтетические среды, относящиеся к средам с неопределенным химическим составом. В них на ряду с соединениями известной химической природы входят вещества неопределенного состава. Эти среды широко используются в микробиологической практике для получения витаминов, антибиотиков, аминокислот и других продуктов жизнедеятельности микроорганизмов.

5.3. Практическая часть

Приборы, реактивы, посуда: йодный раствор (1 г йодистого калия растворить в 5 мл воды, к полученному раствору добавить 1 г йода и довести объем смеси дистиллированной водой до 300 мл), колбы для приготовления сред, стеклянные палочки, набор минеральных солей, глюкоза, пептон , желчь, водяная баня, весы, шпатель, термометр, фарфоровая чашка, пипетка, сахариметр, бумажные фильтры, агар-агар, полотно, вата.

5.3.1.Методика выполнения работы

Приготовление картофельной среды. Нарезать в химический стакан на 150 мл ломтиками 20 г очищенного, промытого водой картофеля, залить 100 мл водопроводной воды, варить 30 минут. Отвар фильтровать через бумажный фильтр и добавить воду до первоначального объема. К полученной жидкости добавить 2 г агар-агара, кипятить до его растворения и установить нейтральную реакцию среды (рН 7). Среду стерилизуют 20 минут при 1 атм.

Приготовление сусла. Зерно ячменя замачить в холодной воде и прорастить при 35°С . После того, как ростки станут вдвое больше, чем длина зерна, зерно высушивают до воздушно-сухого состояния и получают солод. Для приготовления сусла солод крупно размалывают и 250 г его берут на 1 л воды. Для лучшего выделения фермента амилазы смесь подогревают при 57°С до прекращения окрашивания раствора при добавлении йодного раствора (йодная проба на содержание крахмала). Пробы на содержание крахмала проводят в фарфоровой чашке в капле жидкости.

Сусло процедить через полотно, полученный фильтрат нагреть до кипения и кипятить 5 – 10 минут, затем фильтровать через бумажный фильтр. Такое сусло содержит 10 – 20% сахара. Точное его содержание определяют по плотности раствора при помощи сахариметра. Сусло разбавить водой до концентрации сахара 6 – 8% и стерилизовать при 115°С и давлении 0,5 атм. 30 минут.

Приготовление сусло-агара. К приготовленному суслу добавить 2% агара, кипятить до расплавления агара, фильтровать через полотно и стерилизовать таким же способом, как сусло.

Приготовление молочно-солевого агара. Мерным цилиндром отмерить 100 мл 2% стерильного агара, содержащего 6,5% хлорида натрия. Добавить к нему 10 мл обезжиренного стерильного молока.

Приготовление среды Кесслера. Отмерить 1 л водопроводной воды, прибавить 10 г пептона и 50 мл желчи. Смесь прокипятить при помешивании в течение 20 – 30 минут на водяной бане. Затем профильтровать через слой ваты. В полученном фильтрате растворить 2,5 г глюкозы и довести объем до 1 л, рН среды довести до значения 7,4 – 7,6. Добавить 2 мл 1% водного раствора кристаллического фиолетового. Среду разлить в прбирки с поплавками и стерилизовать при давлении 0,1 атм. В течение 10 минут.Готовая среда должна иметь темно-фиолетовый цвет.

Приготовление дрожжевых сред.

Дрожжевой экстракт. 100 г прессованных дрожжей развести в 100 мл воды, смесь кипятить 1 ч, трижды фильтровать через бумажный фильтр и стерилизовать 30 минут при 115°С.

Дрожжевая вода. 5 г сухих дрожжей размешать в 100 мл воды , кипятить 10 минут, фильтровать через бумажный фильтр и стерилизовать по 30 минут текучим паром ежедневно в течение 3 суток.

Приготовление среды Чапека. Взять навески 2 г глюкозы, 0,2 г NaNO₃, 0,1 г K₂HPO₄, 0,05 г MgSO₄, 0,05 г KCL, 0,01 г FeSO₄, вода дистиллированная 100 мл.