4.3.1. 1.Методика выполнения работы

Окраска гранул. К капле суспензии дрожжей на предметном стекле добавить каплю раствора Люголя. Препарат покрыть покровным стеклом и микроскопировать с сухими объективами х8, х40. Гранулы крахмалоподобных веществ окрашиваются в синий цвет, а гранулы гликогеноподобных – в красновато-коричневый.

Окраска валютина и метахроматина.

Для выявления валютина у дрожжей применяют следующий способ. Фиксированный в пламени спиртовки мазок окрасить метиленовым синим в течение 3 минут. Краситель слить, препарат промыть водой и не высушивая, нанести на мазок небольшую каплю 1% раствора серной кислоты. Мазок покрыть покровным стеклом и микроскопировать с сухими объективами х8, х40.

Для выявления валютина у бактерий используют метод Омелянского. Приготовить тонкий мазок клеток, высушить его на воздухе, зафиксировать в пламени спиртовки. На фиксированный мазок налить карболовый фуксин и окрашивать клетки в течение 1 минуты. Краску слить, промыть препарат водой и обесцветить 1% раствором серной кислоты в течение 20 – 30 секунд. Затем кислоту слить, препарат промыть водой и дополнительно окрасить 30 секунд метиленовым синим. Снова промыть водой, высушить и микроскопировать с иммерсионной системой. Гранулы валютина имеют красный цвет и хорошо видны на фоне синей цитоплазмы.

4.3.1.2. Оформление работы.

Рассмотреть под микроскопом и зарисовать в тетради включения полисахаридов и валютина в микробных клетках. Написать отчет о проделанной работе.

4.3.2.Окраска спор у бактерий.

В связи с особенностями физико-химического состава и плотной малопроницаемой оболочки для окраски спор применяют сначала химические вещества, меняющие структуру оболочки. Однако при последующем прокрашивании споры одновременно прокрашивается и цитоплазма клетки, поэтому под микроскопом последняя выглядит однородно окрашенной. Чтобы добиться прокраски только споры, следует такой «перекрашенный» препарат частично обесцветить, отнимая краситель у цитоплазмы и оставляя его в споре. Это легко достигается, так как краситель, адсорбированный спорой, удерживается прочнее, чем адсорбированный цитоплазмой клетки. Поэтому все способы окраски спор основаны на едином принципе. Сначала споры протравливают разными веществами (хромовой, соляной, серной, уксусной кислотами, аммиаком, едким натром или перекисью водорода), затем окрашивают клетку со спорой при нагревании и обесцвечивают цитоплазму, а потом дополнительно окрашивают ее контрастным красителем.

Приборы, реактивы, посуда: микроскоп, предметные стекла, бактериологическая петля, фильтровальная бумага, капельница с водой, капельницы растворами красителей, иммерсионное масло, стерильные пипетки, спиртовки, 1% раствор серной кислоты, 5% раствор хромовой кислоты.

4.3.2. 1.Методика выполнения работы

Метод Циля-Нильсена в модификации Мюллера. До фиксации мазка на пламени препарат готовят обычным способом. Далее на фиксированный и остывший препарат нанести 5% раствор хромовой кислоты. Через 5 – 10 минут кислоту смыть водой. Препарат покрыть полоской фильтровальной бумаги, обильно смочить бумагу карболовым фуксином Циля. Подогреть препарат в пламени спиртовки до появления паров (не до кипения), отвести в сторону и добавить новую порцию красителя. Так в течение 7 минут. При этом важно, чтобы краситель испарялся, но бумага не подсыхала. После охлаждения бумагу снять, препарат промыть водой и тщательно промокнуть фильтровальной бумагой. Далее провести обесцвечивание цитоплазмы клеток, обработать препарат 1% раствором соляной или серной кислоты 16 -18 секунд для бактерий Bacillus mesentericus. При превышении этого времени может обесцветиться и спора.