2.3.Практическая часть.

Существуют простые и дифференцированные способы окраски фиксированных препаратов микроорганизмов. При простой окраске используется какой либо один краситель, например метиленовый синий, фуксин, генциан фиолетовый в щелочных или карболовых растворах. Прокрашивается вся клетка.

Приборы, реактивы, посуда: микроскоп, предметные стекла, бактериологическая петля, фильтровальная бумага, капельница с водой, капельницы с растворами красителей, иммерсионное масло, стерильные пипетки на 1 мл, спиртовки.

2.3.1. Методика выполнения работы.

Для изучения морфологии бактерий приготовить окрашенные фиксированные препараты из кефира, йогурта и мясопродуктов.

При приготовлении мазки из кефира и йогурта материал прокаленной петлей нанести на середину предметного стекла. К капле придвинуть под углом 45° другое предметное стекло. Тотчас же, плотно прижимая это стекло в том же положении под углом, продвинуть его налево по предметному стеклу с исследуемым материалом. Получается равномерно распределенный по поверхности стекла мазок. Мазок высушить на воздухе. Затем зафиксировать в пламени спиртовки. Препарат захватить пинцетом и три – четыре раза медленно провести нижней стороной над пламенем (на границе светлой и темной его части). Окраску препарата провести с помощью метиленового синего. Количество краски должно покрыть всю поверхность мазка. Окраска проводится в течение 3 – 5 минут. По истечении срока окрашивания лишнюю краску слить с препарата и промыть его легкой струей водопроводной воды. Оставшуюся на стекле воду осторожно удалить фильтровальной бумагой. Окрашенный мазок должен быть абсолютно сухим.

При приготовлении препарата из мясопродуктов кусочек мяса, колбасы, печени осторожно захватить стерильным пинцетом и слегка надавить им на чистое предметное стекло, стараясь не сдвинуть в сторону (препарат «отпечаток»). Мазок высушить на воздухе и зафиксировать в пламени спиртовки также, как и в предыдущем случае. Окраску препарата провести с помощью фуксина. Количество краски должно покрыть всю поверхность мазка. Окраска проводится в течение 1 - 2 минут. По истечении срока окрашивания лишнюю краску слить и промыть препарат легкой струей водопроводной воды. Оставшуюся на стекле воду осторожно удалить фильтровальной бумагой.

Приготовленные препараты поместить на предметный столик микроскопа и, пользуясь объективом х8, установить свет. Затем в центр препарата на мазок нанести каплю иммерсионного масла и заменить сухую систему иммерсионной (объектив х90). С помощью макрометрического винта опустить тубус микроскопа до погружения объектива в масло. Пользуясь микрометрическим винтом, поднять тубус и, наблюдая в окуляр, найти появление изображения. Если изображение нерезкое, тусклое или плывет, что-то сделано неправильно : загрязнена фронтальная линза объектива, мешают пузырьки воздуха в масле, случайно закрыта диафрагма, сдвинуто зеркало. Причину некачественного изображения необходимо устранить.

По окончании микроскопирования поднять тубус, снять препарат и осторожно протереть фронтальную линзу объектива сухой хлопчатобумажной салфеткой. Загрязнение фронтальной линзы объектива можно устранить протерев ее салфеткой смоченной очищенным бензином или ксилолом.

Погружать в иммерсионную жидкость можно только иммерсионные объективы (не сухие)!