1.3.2.2. Оформление работы.

Рассмотреть под микроскопом и зарисовать в тетради форму клеток дрожжей и микроскопических грибов, расположение клеток, строение грибницы и органов размножения грибов. Написать отчет о проделанной работе.

1.4. Контрольные вопросы.

1.Что изучает морфология микроорганизмов?

2.В чем отличие прокариотой клетки от эукариотной?

3.Какое строение имеет дрожжевая клетка?

4.Какими способами размножаются дрожжи?

5.В чем отличие культурных и диких дрожжей?

6.Как происходит размножение микроскопических мицелиальных грибов?

7. Назовите признаки характерные для грибов и общие с растениями и животными.

Рекомендуемая литература

[1],c.3-6,33-43, [2] c.18-41

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА № 2

ПРИГОТОВЛЕНИЕ ФИКСИРОВАННЫХ ОКРАШЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ.

1. . Цель работы: приобретение навыков приготовления фиксированных окрашенных препаратов микроорганизмов.

2. Общие сведения

Изучение морфологии микроорганизмов в окрашенном состоянии является наиболее распространенным в микробиологии методом. Этот метод позволяет изучить морфологические особенности клеток микроорганизмов и дает возможность найти различия между ними, а иногда – точно определить изучаемый микроорганизм. Кроме того, этот метод удобен в практической работе и легко доступен благодаря простоте техники окрашивания.

Приготовление окрашенного препарата включает приготовление мазка, фиксацию мазка и окрашивание препарата.

!. Приготовление мазка. Мазок должен быть тонким, так как при этом условии он удобен для изучения микробов. Мазок можно приготовить различными способами. На чистое обезжиренное предметное стекло, например, наносят каплю водопроводной воды и помещают в нее исследуемый материал с помощью прокаленной бактериологической петли. Исследуемый материал слегка растирают в капле воды, а остаток культуры в петле сжигают в пламени горелки. Остудив петлю, приступают к изготовлению мазка: сначала краем петли культуру равномерно размешивают в капле, а затем круговыми равномерными движениями распределяют каплю на площади, составляющей примерно 1/3 предметного стекла. Затем мазок сушат на воздухе при комнатной температуре или слабо нагревании, держа препарат высоко над пламенем горелки. Сильное нагревание препарата при сушке не рекомендуется, так как белки коагулируют, искажая структуру и форму клеток. Высушенный препарат фиксируют.

2. Фиксация мазка. Под фиксацией подразумевают такую обработку живого объекта, которая дает возможность быстро прервать течение жизненных процессов в нем, сохранив тонкую структуру. В результате фиксации клетки прочно прикрепляются к стеклу и лучше прокрашиваются. Фиксация нужна в случае работы с патогенными микроорганизмами для безопасности.

Существует несколько способов фиксации. Наиболее простым и самым распространенным в микробиологии является фиксация над пламенем горелки. В ряде случаев фиксация жаром оказывается слишком грубой. Тогда прибегают к фиксации препарата при помощи химических соединений. При этом фиксатор наливают на мазок или препарат погружают в сосуд с фиксирующей жидкостью на определенное время, а затем высушивают. Используют следующие фиксирующие жидкости метиловый спирт (2-3 минуты), этиловый спирт (10-15 минут), ацетон (5 минут), смесь равных объемов этилового спирта и эфира - по Никифорову (15 минут). Можно применять для фиксации также хромовые соединения, формалин, пары осмиевой кислоты ( несколько секунд).

3. Окрашивание препарата. При окрашивании мазка препарат помещают на препаратодержатель. На мазок наносят несколько капель красителя. В зависимости от вида красителя и цели исследования продолжительность окрашивания меняется от 1 до 5 минут, в отдельных случаях до 3 минут и дольше. По окончании окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют воду, подсушивают на воздухе и микроскопируют. Окрашивание препаратов микробов не является механическим процессом проникновения краски в микробную клетку. Механизм окраски следует рассматривать как процесс физико-химический. Соединение протопласта микробной клетки с красителем является в большинстве случаев весьма прочным, не поддается разрушению или простому вымыванию водой. В ряде случаев различные составные части клетки избирательно окрашиваются различными красящими растворами.

Для окрашивания микроорганизмов применяют кислые и основные красители. Первые вступают в реакцию с веществами основной, вторые - кислотной природы. Поскольку в белках есть основные группы (NH₂^¯) и кислотные (COOH¯) радикалы, клеточные структуры хорошо окрашиваются и теми и другими красителями.

Из основных красителей наиболее часто в микробиологии применяют: красные – нейтральный красный, сафранин, фуксин, синие – мителеновая синь, фиолетовые – генциан фиолетовый, кристаллический фиолетовый, зеленые – метиленовый зеленый, малахитовый зеленый, коричневые – везувин, хризоидин, черные – индулин. Кислые красители могут быть следующие: красные и розовые – кислый фуксин, эритрозин, черные – нигрозин, желтые – конго, флуоресцин.