2 Материалы и методы исследования

2.1 Объект исследования

В качестве объекта исследования использовали уксуснокислые бактерии – продуценты гель – пленки бактериальной целлюлозы и нанокомпозиты, полученные на основе БЦ.

2.2 Методы исследования

2.2.1 Условия культивирования уксуснокислых бактерий

Для культивирования уксуснокислых бактерий использовали мелассную среду следующего состава, г/л:

1. Свекловичная меласса - 70;

2. Пептон - 20;

3. Дрожжевой экстракт - 10;

4. Этанол - 7;

5. Дистиллированная вода - 1л.

Режим стерилизации среды 120°С в течении 20 минут при 1 атм. Культивирование проводили в колбах на 250 мл, содержащих 60 мл среды, на качалках Unvironmental Shaker - Incubator FS - 20/60 при 250 об/мин в течение 5 суток при температуре 30°С и в стационарных условиях при температуре 30°С в течение 5 суток.

2.2.2 Выделение бактериальной целлюлозы

БЦ, полученную при культивировании уксуснокислых бактерий, обрабатывали 0,1 н раствором NaOH при 80°С в течении 30 минут для удаления клеток и компонентов бактериальной среды. От раствора щелочи бактериальную целлюлозу отмывали дистиллированной водой, 0,5% водным раствором уксусной кислоты и снова водой до нейтральной реакции. Обработку повторяли 3 раза, затем раствор центрифугировали 20 минут при 3000 об/мин. Далее целлюлозу высушивали при 80°С до постоянной массы [21].

2.2.3 Определение pH

Определение рН проводили потенциометрическим методом с помощью прибора «рН meter HI 8014» .

2.2.4 Приготовление микроскопических препаратов

Для изучения микроморфологии культур готовили фиксированные микроскопические препараты бактерий. Окрашивали их по Граму и красителем метиленовым синим.

При окраске бактерий по Граму на предварительно обезжиренных и высушенных предметных стеклах делали мазки. Препараты высушивали на воздухе. Фиксировали над пламенем горелки и окрашивали в течение 1 - 2 минут кристаллическим фиолетовым. Краситель сливали, не промывая препарат водой, обрабатывали его 1 - 2 минуты раствором Люголя до почернения. Сливали раствор Люголя, препарат обесцвечивали 96%-ным раствором этилового спирта. Через полминуты смывали спирт водой и дополнительно окрашивали в течение 1 - 2 минут водным фуксином. Краситель смывали водой, препарат высушивали на воздухе.

При окраске бактерий красителем метиленовым синим на предварительно обезжиренных и высушенных предметных стеклах делали мазки. Препараты высушивали на воздухе, фиксировали над пламенем горелки и окрашивали в течение 1 - 2 минут метиленовым синим. Краситель смывали водой, препараты высушивали на воздухе [50].

Микроскопирование и фотографирование препаратов осуществляли с помощью видеомикроскопа Micros (Австрия) при увеличении в 1000 раз.

2.2.5 Определение толщины ГПБЦ

Толщину ГПБЦ определяли на приборе толщинометре CHY-C2 (Германия) предназначенном для определения толщины плёнок, бумаги, картона.

2.2.6 Определение прочности и растяжения ГПБЦ

Исследования проводили при помощи универсальной испытательной машины – XLW (Китай - США). Плёнку размером 20×50 мм зажимали между параллельными горизонтальными держателями и проводили измерения

2.2.7 Приготовление стандартных растворов антибиотиков

Для построения калибровочного графика готовили ряд растворов известной концентрации. Для этого последовательно взвешивали на аналитических весах 0,3; 0,5; 0,7; 0,9 и 1 г исходного антибиотика. Полученные навески помещали в мерную колбу на 100мл и доводили до метки дистиллированной водой при постоянном перемешивании. Таким образом, получали растворы концентрацией 3, 5, 7, 9, и 1 % .

2.2.8 Построение калибровочного графика раствора метронидазола

Метод основан на способности нитрогруппы метронидазола образовывать окрашенные растворы (красно-коричневого цвета) с фенолом в щелочной среде. В пробирки отбирали 1М раствор фенола и 1 М раствор гидроксида калия, ставили на водяную баню и доводили до кипения. После закипания добавляли раствор метронидазола известной концентрации. Параллельно готовили контрольный раствор, содержащий вместо антибиотика дистиллированную воду. В полученных растворах определяли оптическую плотность на приборе СФ UV mini - 1240. По полученным данным построили калибровочный график зависимости оптической плотности(Y) от концентрации раствора антибиотика (X) (рисунок 2.1).

Рисунок 2.1 – Калибровочный график раствора метронидазола