4. Определение содержания небелкового азота (нба)

Метод основан на отделении небелковых азотистых веществ от белковых, путем осаждения последних, трихлоруксусной кислотой.

Оборудование, материалы, реактивы

Весы аналитические, весы технические, колбы Къельдаля, мерные цилиндры на 25 см³, отгонные колбы на 500 см³, парообразователь, водяной холодильник, плита электрическая, колбы плоскодонные на 250 см³ , кислота серная плотностью 1840 кг/м³, кислота серная 0,1 н раствор, гидроксид натрия 33 %-ный раствор, гидроксид натрия 0,1 н раствор, трихлоруксусная кислота (ТХУ), медный купорос кристаллический, индикатор метиловый красный, универсальный индикатор РКС, марля, фильтровальная бумага.

Проведение испытаний:

Навеску фарша 50 г, взвешенного с погрешностью не более 0,01 г., растирают в ступке со 100 г дистиллированной воды, переносят в мерную колбу емкостью 250 см³, настаивают 30 минут при периодическом взбалтывании, после чего доводят до метки дистиллированной водой и фильтруют через четыре слоя марли.

В коническую колбу отбирают 100 см³ полученного фильтрата и небольшими порциями при взбалтывании жидкости приливают к ней 25 см³ 20 %-го раствора трихлоруксусной кислоты. Для интенсификации осаждения колбу с пробой осторожно подогревают на водяной бане. После 30-ти минутного отстаивания жидкость отфильтро-вывают через сухой складчатый фильтр.

В колбу Къельдаля отбирают 10 см³ фильтрата, приливают 5 см³ концентрированной серной кислоты (плотностью 1840 кг/м³), добавляют несколько мелких кристаллов медного купороса (0,2 - 0,3 г) и ведут минерализацию. Колбу с содержимым осторожно нагревают в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости.

Когда содержимое колбы станет однородным, прекращают нагревание, дают остыть и добавляют 0,5 г сернокислого калия и продолжают нагревать до тех пор, пока жидкость в колбе не станет прозрачной, зеленовато - голубой окраски без бурого оттенка.

Внутренние стенки колбы должны быть совершенно чистыми.

По окончании сжигания содержимое колбы охлаждают и количественно переносят в отгонную колбу вместимостью 500-750 см³. Колбу для сжигания тщательно ополаскивают, проверяя полноту смывания добавлением 1-2 капель раствора метилового красного.

Общий объем раствора в отгонной колбе должен быть не более 250 - 300 см³.

Приемником служит коническая колба вместимостью 250 см³, в которую из бюретки налито 25 см³ 0,1 н раствора серной кислоты.

Конец трубки холодильника должен быть погружен в раствор серной кислоты.

В отгонную колбу осторожно, по стенке, приливают 50 см³ 33 %-го раствора гидроксида натрия и быстро закрывают ее пробкой, соединенной посредством каплеуловителя с холодильником, содержимое осторожно перемешивают и нагревают.

Реакция среды в колбе должна быть резко щелочной.

Внимание: При проведении отгонки, должно быть включено охлаждение отгонной колбы холодной водой.

После закипания жидкости в колбе приемник устанавливают так, чтобы конец трубки холодильника находился на некотором расстоянии от поверхности раствора и продолжают отгонку. Окончание отгонки проверяют по индикаторной бумаге.

Если отгонка закончена, капля дистиллята должна иметь рН не больше 7.

По окончании отгонки конец трубки холодильника обмывают водой в приемную колбу. Содержащийся в приемной колбе избыток серной кислоты оттитровывают 0,1 н раствором гидроксида натрия в присутствии метилового красного.

Одновременно проводят контрольный анализ титрования 25 см³ 0,1 н раствора серной кислоты без навески исследуемого образца.

Количество небелкового азота (Хнба) вычисляют по формуле:

Хнба = , %

где: V₁ - объем 0,1 н раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование серной кислоты в контрольном опыте, см³

V₂ - объем 0,1 н раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование серной кислоты в рабочем опыте, см³;

V₃ - объем водной вытяжки в мерной колбе, см³;

V₄ - объем водной вытяжки, взятый для осаждения белков, см³;

V₅ - объем водной вытяжки, взятый для осаждения белков с учетом объема трихлоруксусной кислоты, см³;

V₆ - объем фильтрата, взятый для минерализации, см³;

k - коэффициент пересчета на точный 0,1 н раствор гидроксида натрия;

m - масса навески, г;

0,0014 - количество азота, эквивалентное 1 см³ 0,1 н раствора гидроксида натрия.