3. Определение содержания общего азота (оа)

Метод основан на окислении органического вещества при сжигании его в серной кислоте в присутствии катализатора, отгонке образующегося аммиака паром, улавливании его раствором серной кислоты и определении содержания азота методом титрования.

Определение: «сырого» и «истинного» протеина:

«Сырой протеин» отражает содержание общего азота (белкового и небелкового), которое пересчитывается на протеин путем умножения его на определенный коэффициент (6,25).

Сущность метода заключается в разрушении органического вещества серной кислотой в присутствии катализатора, высвобождении продукта реакции щелочью и последующей отгонке. Количество образовавшегося аммиака определяют титрованием.

Массовая доля «сырого протеина» в % определяется по формуле:

Хсп = ОА  6,25

«Истинный протеин» – это массовая доля небелковых азотсодержащих веществ.

В основе определения лежит реакция, в ходе которой белок выпадает в осадок и при фильтровании остается на фильтре, при этом небелковый азот переходит в фильтрат.

Массовую долю «истинного протеина» в % определяют по формуле:

Хип = (ОА – НБА)  6,25

где: НБА - массовая доля небелковых азотсодержащих веществ, %

ОА - содержание общего азота (белкового и небелкового), %

6,25 - коэффициент пересчета азота на белковые вещества.

Оборудование, материалы, реактивы

Весы аналитические, весы технические, колбы Къельдаля, мерные цилиндры на 25 см³, отгонные колбы на 500 см³, парообразователь, водяной холодильник, плита электрическая, колбы плоскодонные на 250 см³ , кислота серная плотностью 1840 кг/м³, кислота серная 0, 1 н раствор, гидроксид натрия 33 %-ный раствор, гидроксид натрия 0,1 н раствор, медный купорос кристаллический, индикатор метиловый красный, универсальный индикатор РКС.

Реакции протекают по уравнениям:

RCHNH₂COOH + H₂SO₄  CO₂ + SO₂ + H₂O + NH₃;

2NH₃ + H₂SO₄ (NH₄)₂SO₄;

(NH₄)₂SO₄ + 2NaOH  2NH₃ + 2H₂O + Na₂SO₄;

2NH₃ + H₂SO₄ (NH₄)₂SO₄ + H₂SO₄.

избыток

Проведение испытаний

Навеску рыбного фарша в количестве 0,6 - 1,0 г взвешивают с абсолютной погрешностью до 0,001г в закрытую с одной стороны трубочку из фильтровальной бумаги, помещают в колбу Къельдаля для минерализации.

В колбу добавляют несколько мелких кристаллов медного купороса (0,2-0,3) г и приливают 10-20 см³ серной кислоты (плотностью 1840 кг/м³). Затем колбу с содержимым осторожно нагревают в вытяжном шкафу, не допуская разбрызгивания жидкости.

Когда содержимое колбы станет однородным, нагревание прекращают, дают остыть, добавляют 0,5 г сернокислого калия и продолжают нагревание до тех пор, пока жидкость в колбе не станет прозрачной, зеленовато - голубой окраски без бурого оттенка.

Внутренние стенки колбы должны быть совершенно чистыми. Это достигается осторожным взбалтыванием содержимого колбы для смывания со стенок темных, обугленных частиц.

По окончании сжигания содержимое колбы охлаждают и количественно переносят дистиллированной водой в отгонную колбу вместимостью 500-750 см³.

Колбу для сжигания тщательно ополаскивают дистиллированной водой, полноту смывания проверяют добавлением 1-2 капель раствора метилового красного. Общий объем раствора в отгонной колбе должен быть не более 250-300 см³. Приемником служит коническая колба вместимостью 200-300 см³, в которую из бюретки наливают 25-30 см³ 0,1 н раствора серной кислоты. Конец трубки холодильника должен быть погружен в раствор серной кислоты.

В отгонную колбу осторожно, по стенке, избегая смешивания жидкостей, приливают 50 см³ 33 %-го раствора гидроксида натрия (NaOH), бросают кусочек лакмусовой бумаги и быстро закрывают ее пробкой, соединенной посредством каплеуловителя с холодильником, содержимое осторожно перемешивают и нагревают. Реакция среды в колбе в начале отгонки должна быть резко щелочной.

Внимание: При проведении отгонки должно быть включено охлаждение отгонной колбы холодной водой.

После закипания жидкости в колбе приемник опускают так, чтобы конец трубки холодильника находился на некотором расстоянии от поверхности раствора и продолжают отгонку. Окончание отгонки проверяют по лакмусовой бумаге. Отгонка считается законченной, если капля дистиллята не вызывает посинения лакмусового индикатора.

При появлении в конце отгонки при кипении толчков отгонку прекращают.

По окончании отгонки конец трубки холодильника обмывают дистиллированной водой в приемную колбу и содержащийся в ней избыток серной кислоты оттитровывают 0,1 н раство-ром гидроксида натрия в присутствии (1-3 капель) метилового красного.

Одновременно аналогично проводят контрольный анализ титрования 25 см³ 0,1 н раствора серной кислоты без навески исследуемого образца.

Массовую долю белковых веществ (Хсп) вычисляют по формуле:

Хсп = , %

где: V - объем 0,1 н раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование серной кислоты в контрольном опыте, см³

V₁ - объем 0,1 н раствора гидроксида натрия, израсходованный на титрование серной кислоты в рабочем опыте, см³;

6,25 - коэффициент пересчета азота на белковые вещества.

К - коэффициент пересчета на точный 0,1 н раствор гидроксида натрия;

0,0014 - количество азота, эквивалентное 1 см³ 0,1н раствора гидроксида натрия, г.

m –навеска сырья , г;