Электронная микроскопия

Различные способы световой микроскопии позволяют изучать сравнительно крупные микроорганизмы (бакте­рии, простейшие), но не дают возможности наблюдать объекты, величина которых меньше чем 0,2 мкм, так как разрешающая способность микроскопа зависит от длины волны видимого света. Поэтому в световом микроскопе не может быть изучено строение вирусов.

Принципиально новые возможности для изучения тон­кого строения бактерий и вирусов появились после изоб­ретения электронного микроскопа.

В электронном микроскопе вместо световых волн для построения изображения используют поток электронов в глубоком вакууме.

В качестве «линз», фокусирующих электроны, служит электромагнитное поле, создаваемое электромагнитными катушками. Изображение в электронном микроскопе на­блюдают на флюоресцирующем экране и фотографируют. Объекты при электронной микроскопии находятся также в

глубоком вакууме, поэтому подвергаются фиксации и специальной обработке. Кроме того, они должны быть очень тонкими, так как поток электронов сильно поглоща­ется. В связи с этим в качестве объектов используют ультратонкие срезы толщиной 20—50 нм, что значительно меньше толщины вирусных частиц. Разрешающая способ­ность современных электронных микроскопов равна 0,15 нм, что позволяет получить полезное увеличение в милли­оны раз.

Электронный микроскоп по своим размерам и сложно­сти устройства очень отличается от светового. Колонна микроскопа, в которой находится объект и разгоняются электроны, превышает рост человека, а для размещения микроскопа нужна отдельная комната.

Техника приготовления мазка

Для работы необходимо иметь чистые и обезжиренные предметные и покровные стекла. Новые стекла кипятят 15—20 мин в 2—5% растворе соды или мыльной воде, споласкивают водой и помещают в слабую хлороводородную кислоту, затем тщательно промывают водой.

Стекла, бывшие в употреблении и за­грязненные красителями или иммерсион­ным маслом, можно обработать двумя способами: 1) погрузить на 2 ч в концен­трированную серную кислоту или хромо­вую смесь, а затем тщательно промыть;

кипятить 30—40 мин в 5% растворе соды или щелочи. Необработанные стекла можно обезжирить, натерев их мылом, а затем очистить от него сухой тканью.

Внимание! Если стекло хорошо обезжирено, то капля воды растекается на нем равномерно, не распадаясь на мелкие капли.

Хранят стекла в сосудах с притертыми пробками в смеси Никифорова (равные объемы спирта и эфира) или в 96% спирте. Из растворов стекла извлекают пинцетом.

Внимание! При работе стекла держат пальцами за грани.

Материал для исследования наносят на предметное стекло бактериальной петлей, иглой или пастеровской пипеткой. Чаще всего применяют бактериальную петлю, сделанную из платиновой или нихромовой нити длиной 5—6 см. Петлю закрепляют в петледержателе или впаивают в стеклянную палочку. Конец проволоки сгиба­ют в виде кольца размером 1x1,5 или 2x3 мкм.

Внимание! Правильно приготовленная петля при погружении в воду и извлечении оттуда сохраняет водную пленку.

Перед приготовлением мазка рабочую часть петли прожигают в пламени горелки в вертикальном положении: сначала саму петлю, а затем металлический стержень. Эту манипуляцию проводят и после окончания посева.