Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам

В клинической практике чувствительными к антибиоти­кам считают те микроорганизмы, на которые антибиотики оказывают бактериостатическое или бактерицидное дей­ствие.

При любом лабораторном исследовании критерием чувствительности микроорганизмов к антибиотикам явля­ется минимальная концентрация антибиотика, ингибиру­ющая (задерживающая) рост возбудителя заболевания при стандартных условиях постановки опыта.

Для определения лекарственной чувствительности оп­тимальным является использование чистой культуры возбудителя. Выделять культуры микробов из организма для исследования на чувствительность следует до начала лечения антибиотиками, так как под их воздействием рост возбудителя заболевания может быть полностью угнетен.

Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам определяют методом диффузии в агар с применением стандартных дисков или методом серийных разведений в жидких и плотных питательных средах.

Методы определения

Метод дисков. Взвесь изучаемой культуры засевают «газоном». В качестве посевного материала можно использовать суточную бульонную культуру или 1 миллиардную микробную взвесь, приготовленную по опти­ческому стандарту мутности № 10 (см. ниже). Засеянные чашки подсушивают 30—40 мин при комнатной темпера­туре. Затем на поверхность засеянного агара пинцетом накладывают бумажные диски, пропитанные растворами различных антибиотиков. Каждый диск слегка прижима­ют браншами пинцета, чтобы он плотно прилегал к поверхности агара. Диски накладывают на равном рассто­янии друг от друга и на расстоянии 2 см от края чашки. Одну чашку можно использовать для изучения чувстви­тельности одного штамма к 4—5 антибиотикам.

Засеянные чашки с нанесенными на них дисками помещают в термостат при 37° С на 18 — 24 ч. Чашки ставят вверх дном, чтобы избежать попадания конденса­ционной воды на поверхность посевов.

Учет результатов. Действие антибиотиков оцени­вают по феномену задержки роста вокруг диска. Диаметр зон задержки роста микробов вокруг дисков определяют с помощью линейки, включая диаметр самого диска. Между степенью чувствительности микроба к антибиотикам и величиной зоны отсутствия роста имеют­ся следующие соотношения.

В ответе указывают, какой чувствительностью облада­ет исследуемый штамм, а не размер зоны задержки роста.

В ряде случаев определяют чувствительность микроор­ганизмов к антибиотикам в нативном материале (гной, раневое отделяемое и др.). При этом материал наносят на поверхность питательного агара и равномерно растирают по поверхности стерильным стеклянным шпателем, а потом накладывают диски. Метод дисков для определения чувствительности микроорганизмов вследствие простоты и доступности широко применяют в практических лаборато­риях и расценивают как качественный метод.

Метод серийных разведений в жидкой питательной среде. Этот метод является точным количественным мето­дом, его применяют в научной работе и в особо важных случаях в лабораториях больниц и профилактических учреждений.

Для постановки опыта необходимо иметь чистую куль­туру испытуемого микроорганизма, основной раствор антибиотика, мясопептонный бульон на переваре Хоттингера, содержащий 1,2—1,4 г/л аминного азота.

Активность антибиотиков выражают в ЕД/мл или мкг/мл. Для приготовления основного раствора антибиоти­ка используют антибиотики, имеющиеся в продаже с указанием количества их во флаконе.

Если на этикетке вместо количества единиц во флако­не дозировка указана в единицах массы, то следует иметь в виду, что 1 г активности для большей части антибиоти­ков соответствует 1 млн. ЕД. Из этого раствора и должны быть приготовлены требуемые разведения антибиотиков.

Готовят взвесь культуры микроорганизмов, выросшей на плотной питательной среде. Полученную взвесь сравни­вают с оптическим стандартом мутности № 10 (см. ниже), а затем разводят стерильным изотоническим раствором натрия хлорида до 10⁶ микробных тел в 1 мл. Для получения соответствующего разведения микробной взве­си готовят ряд последовательных десятикратных разведе­ний (см. ниже).

Постановка опыта. В 12 стерильных пробирок разливают по 1 мл жидкой питательной среды. В 1-ю пробирку вносят 1 мл основного раствора антибиотика, содержащего, например, 32 ЕД в 1 мл. Содержимое 1-й пробирки перемешивают и 1 мл переносят во 2-ю пробир­ку, из 2-й — в 3-ю, из 3-й — в 4-ю и так до 10-й, из которой 1 мл удаляют. Таким образом, 1-я пробирка будет содер­жать 16 ЕД, 2-я — 8 ЕД, 3-я—4 ЕД и т. д. Для приготов­ления каждого разведения используют отдельную пипет­ку. Содержимое 11-й пробирки служит контролем роста бактерий, а 12-й — контролем стерильности питательной среды. Во все пробирки, кроме 12-й, вносят 0,1 мл испытуемой культуры определенной густоты. Посев инку­бируют в термостате в течение 18—24 ч и регистрируют результаты опыта.

Учет результатов проводят при наличии роста в контроле культуры и отсутствии роста в контроле среды. Затем отмечают последнюю пробирку с полной видимой задержкой роста микробов. Количество антибиотика в этой пробирке является минимальной ингибирующей кон­центрацией для испытуемого штамма и определяет сте­пень его чувствительности к данному антибиотику. В ответе, выдаваемом лабораторией, указывают минималь­ную ингибирующую концентрацию.