Стерилизация

Стерилизация — это обеспложивание, т. е. полное осво­бождение объектов окружающей среды от микроорганиз­мов и их спор.

Стерилизацию производят различными способами:

физическими (воздействие высокой температуры, УФ-лучей, использование бактериальных фильтров);

химическими (использование различных дезинфек­тантов, антисептиков);

биологическим (применение антибиотиков).

В лабораторной практике обычно применяют физиче­ские способы стерилизации.

Возможность и целесообразность, использования того или иного способа стерилизации обусловлена особенностя­ми материала, подлежащего стерилизации, его физически­ми и химическими свойствами.

Физические способы

Прокаливание в пламени горелки или фламбирование — способ стерилизации, при котором происходит полное обеспложивание объекта, так как погибают и вегетатив­ные клетки, и споры микроорганизмов. Обычно прокали­вают бактериологические петли, шпатели, пипетки, пред­метные и покровные стекла, мелкие инструменты. Не следует стерилизовать прокаливанием ножницы, скальпе­ли, так как под действием огня режущая поверхность становится тупой.

Сухожаровая стерилизация

Стерилизацию сухим жаром или горячим воздухом осуществляют в печах Пастера (сушильных сухожаровых шкафах). Печь Пастера — шкаф с двойными стенками, изготовленный из термостойких материалов — металла и асбеста. Нагревают шкаф с помощью газовых горелок или электронагревательных приборов. Шкафы с электриче­ским нагревом снабжены регуляторами, обеспечивающими необходимую температуру. Для контроля температуры имеется термометр, вставленный в отверстие верхней стенки шкафа.

Сухим жаром стерилизуют в основном лабораторную посуду. Подготовленную для стерилизации посуду неплот­но загружают в печь, чтобы обеспечить равномерный и надежный прогрев стерилизуемого материала. Дверь шка­фа плотно закрывают, включают обогревательный при­бор, доводят температуру до 160—165 °С и при этой температуре стерилизуют 1 ч. По окончании стерилизации выключают обогрев, но дверцу шкафа не открывают до тех пор, пока печь не остынет; в противном случае холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование трещин на горячей посуде.

Стерилизацию в печи Пастера можно проводить при различном температурном режиме и экспозиции (время стерилизации) (табл. 1).

Жидкости (питательные среды, изотонический раствор хлорида натрия и др.), предметы из резины и синтетиче­ских материалов стерилизовать сухим жаром нельзя, так как жидкости вскипают и выливаются, а резина и синтети­ческие материалы плавятся.

Для контроля стерили­зации В печи Пастера шел- Таблица 1. Режим стерилизации

ковые нити смачивают в культуре спорообразу­ющих бактерий, подсуши­вают, помещают в сте­рильную чашку Петри и ставят в печь Пастера.

Стерилизацию проводят

при температуре 165 °С 1ч (для контроля часть нитей оставляют при комнатной температуре). Затем простери- лизованные и контрольные нити кладут на поверхность агара в чашку Петри или помещают в пробирки с бульоном и инкубируют в термостате при температуре 37 “С в течение 2 сут. При правильной работе печи Пастера в пробирках или чашках с питательными средами, куда были помещены простерилизованные нити, роста не будет, так как споры бактерий погибнут, в то время как споры бактерий на нитях, не подвергавшихся стерилиза­ции (контрольные), прорастут и на питательных средах будет отмечен рост.

Для определения температуры внутри печи Пастера можно использовать сахарозу или пищевой сахарный песок, карамелизующиеся при температуре 165—170 °С.

Подготовка лабораторной посуды к стерилизации в печи Пастера. Лабораторную посуду (чашки Петри, пипетки градуированные и пастеровские, флаконы, колбы, пробир­ки) перед стерилизацией необходимо тщательно вымыть, высушить и завернуть в бумагу, иначе после стерилизации она может снова загрязниться бактериями воздуха.

Чашки Петри завертывают в бумагу по одной или несколько штук либо укладывают в специальные металли­ческие пеналы.

В верхние концы пипеток вставляют ватные тампоны, предупреждающие попадание исследуемого материала в рот. Градуированные пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4—5 см. На бумаге отмечают объем завернутой пипетки. В пеналах градуированные пипетки стерилизуют без дополнительного завертывания в бумагу.

Примечание. Если градуировка на пипетках плохо заметна, ее восстанавливают перед стерилизацией. На пипетку наносят масляную краску и, не дав краске высохнуть, в нее втирают с помощью тряпочки порошок бария сульфата. После этого тряпкой снимают избыток краски, которая остается только в насечках градуировки. Обработанные таким образом пипетки следует сполоснуть.

Острые концы пастеровских пипеток запаивают в пламени горелки и заворачивают в бумагу по 3—5 штук. Заворачивать пастеровские пипетки нужно осторожно, чтобы не обломать запаянные концы капилляров.

Флаконы, колбы, пробирки закрывают ватно­марлевыми пробками. Пробка должна входить в горлышко сосуда на ²/з своей длины, не слишком туго, но и не свободно. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме проби­рок) надевают бумажный колпачок. Пробирки связывают по 5—50 штук и обертывают поверх бумагой.

Примечание. При высоких температурах бумага, в которую завертывают чашки и пипетки, и вата желтеют и даже могут обугливать­ся, поэтому каждый новый сорт бумаги, получаемый лабораторией, следует испытывать при принятом температурном режиме.