- •Отчет о выполнении лабораторных работ по биохимии.
- •1. Определение концентрации красителя бромфенолового синего
- •График 1.
- •Подсчет числа клеток в 1 мл ночной культуры e.Coli с помощью метода серийных разведений и посева клеток на чашки Петри. Определение зависимости od600 от количества клеток.
- •3. Приготовление агарозного геля (демонстрация) и проведение горизонтального электрофореза выданных образцов днк.
- •4. Приготовление акриламидного геля (демонстрация) и проведение электрофореза выданных образцов белка.
Отчет о выполнении лабораторных работ по биохимии.
Отчет подготовлен 1 группой, выполнявшей работы 29 марта 2013 года:
1. Муратов Сергей 002
2. Пестров Никита 002
3. Чернодубов Даниил 002
4. Полякова Злата 001
5. Нехаев Дмитрий 002
6. Яковлева Елена 002
7. Сахарутов Денис 002
8. Татаринцев Михаил 001
9. Топеха Артур 002
10. Пичкур Евгений 001
1. Определение концентрации красителя бромфенолового синего
Для построения калибровочного графика требуется определить концентрацию в каждой из лунок A1-A12 (для B1-B12, C1-C12 результаты будут точно такие же в силу того, что методика последовательного разбавления одинакова для всех трех рядов, а погрешность самплера мы считаем близкой к нулю).
Таблица 1. Концентрация красителя в лунках
Номер лунки |
Концентрация, мг/мл |
1 |
0,1 |
2 |
0,06 |
3 |
0,036 |
4 |
0,0216 |
5 |
0,01296 |
6 |
0,007776 |
7 |
0,0046656 |
8 |
0,00279936 |
9 |
0,001679616 |
10 |
0,00100777 |
11 |
0,000604662 |
12 |
0 |
Расчетная формула получена по следующей логике: возьмем две лунки, обозначим их 1 и 2. Пусть в левой лунке находится вещество с концентрацией n, а объем всего раствора в ней равен V1 (в нашем случае равный 0.25 мл). При переносе в правую лунку мы берем из левой лунки некий фиксированный объем v (равный 0.15 мл в нашем случае) раствора с концентрацией n1. Таким образом, мы переносим n1 (мг/мл) * v (мл) = m (мг) вещества. Чтобы определить концентрацию в правой лунке (n2) нужно m поделить на объем всего раствора во второй лунке V2 (в нашем случае равен 0.25 мл, поскольку изначально там было 0.1 мл буфера, и мы добавили туда 0.15 мл раствора из левой лунки). Таким образом, формула будет следующая:
n2 = (n1 * v) / V2.
n2 = n1 * 0.15/0.25 = n1 * 3/5 = 0.6*n1.
Поскольку v и V2 для каждой лунки у нас постоянны, то формула для нахождения концентрации в лунке с номером i следующая:
Ni = N1*(0.6)^(i-1);
Теперь наша задача — построить калибровочный график для определения неизвестной концентрации красителя, используя данные об оптической плотности образцов в лунках (таблица 2.1). Сначала мы усредняем значения оптической плотности в лунках A12,B12,C12 с буферным раствором, а потом вычитаем это значение из средних оптических плотностей для трех рядов растворов с одинаковой концентрацией (A1-A11, B1-B11, C1-C11). Затем мы строим зависимость оптической плотности от посчитанных в первом пункте концентраций (таблица 1). Результатом этих действий является таблица 2.2 и график 1 (ответ к заданию 1).
Таблица 2.1:
|
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
A |
6,913333333 |
4,17 |
2,79 |
1,676666667 |
1,216666667 |
0,423333333 |
0,453333333 |
0,356666667 |
0,256666667 |
0,213333333 |
0,176666667 |
0,14 |
B |
6,976666667 |
4,31 |
2,413333333 |
1,723333333 |
1,116666667 |
0,726666667 |
0,47 |
0,346666667 |
0,256666667 |
0,21 |
0,173333333 |
0,123333333 |
C |
7,066666667 |
4,553333333 |
2,673333333 |
1,466666667 |
1,076666667 |
0,69 |
0,496666667 |
0,34 |
0,256666667 |
0,236666667 |
0,183333333 |
0,126666667 |
Таблица 2.2:
Номер лунки |
Оптическая плотность, D |
Концентрация раствора n, мг/мл |
1 |
6,8556 |
0,100000 |
2 |
4,2144 |
0,060000 |
3 |
2,4956 |
0,036000 |
4 |
1,4922 |
0,021600 |
5 |
1,0067 |
0,012960 |
6 |
0,4833 |
0,007776 |
7 |
0,3433 |
0,004666 |
8 |
0,2178 |
0,002799 |
9 |
0,1267 |
0,001680 |
10 |
0,0900 |
0,001008 |
11 |
0,0478 |
0,000605 |
12 |
0,0000 |
0,000000 |