2.3. Подавление ионизации в ысокоэффективной хидкостной хроматографии

При определении заряженных сорбатов методы в ВЭЖХ применяют особые варианты. В водных и водно-органических растворах карбоновые кислоты могут существовать как в нейтральной, так и в ионизированной (анионной) формах, причем соотношение этих форм зависит от рН. В результате в ОФ ВЭЖХ пики кислот зачастую асимметричны, а величины удерживания недостаточно стабильны. Указанные осложнения легко преодолеваются, если с помощью буферного раствора или добавки кислоты поддерживать рН подвижной фазы 2-3. Такой режим иногда называют “режимом подавления ионизации”. При анализе оснований преодолеть эти проблемы труднее. Метод подавления ионизации оснований применить сложнее, так как силикагели неустойчивы при рН>7,5. При использовании кислых буферных растворов достигается фиксация отношений протонированной и нейтральной форм оснований. Появляется возможность хроматографировать многие вещества этой группы в обращено-фазовом режиме.

2.4. Ион-парная обращено-фазовая ВЭЖХ

Наиболее гидрофильные органические кислоты (например, муравьиная) и основания (например, метиламин, гидразин) в ОФ ВЭЖХ характеризуются малыми величинами удерживания, непригодными для аналитических работ. Для таких сорбатов можно рекомендовать ионообменную, либо ион-парную хроматографию. В последнем случае в качестве неподвижных фаз используют те же алкилсиликагели, а подвижная фаза помимо буферного раствора содержит гидрофобный противоион. При разделении анионов в качестве ион-парных добавок используют крупные органические катионы (бромиды тетрабутиламмония, цетилтриметиламмония и др.), при разделении катионов – органические анионы (додецилсульфат). Добавка такого ион-парного агента приводит к относительному вырастанию удерживания сорбатов и может помимо обеспечения необходимого удерживания, служить так же средством изменения селективности процесса.

2.4. Детекторы в вэжх

После разделения для определения определяемых соединений в используют ряд детекторов, сравнение которых показано в табл.1.

Таблица 1. Детекторы, используемые в ВЭЖХ

Детектор	Предел обнаружения (г/мл)	Определяемые вещества	Селектив-ность детектора
Флуориметрический	10-9-10-11	Полиароматические углеводороды Хиноны Производные аминокислот Некоторые витамины (B2, B6)	Да
Электрохимический (амперометрический)	10-8-10-10	Гидразины Фенолы Сахара Биогенные амины Жирорастворимые витамины	Да
Спектрофотометрический	10-7-10-8	Ароматические соединения (при 230-270 нм) Гетероциклические соединения Непредельные углеводороды В-ва, поглощающие в видимой области спектра	Да/Нет
Масс-спектрометрический	10-6-10-7		Да/Нет
Рефрактометрический	10-5-10-6	Сахара Алифатические карбоновые кислоты Амины	Нет