Хід роботи
1. Екстракція цукрів водою
Зважити 5 г досліджуваного матеріалу (яблука, капуста, морква, цибуля), подрібнити і розтерти до гомогенної маси в порцеляновій ступці з невеликою кількістю води, нагрітої до 70°С. Розтерту масу кількісно перенести в конічну колбу на 100 мл, об'єм витяжки довести до 50 мл гарячою дистильованої водою і залишити на 10 хв для екстракції. Після закінчення зазначеного часу екстракт охолодити, процідити через лійку Шотта і кількісно перенести витяжку в мірну колбу. При необхідності довести об'єм водою до 50 мл.
Обов'язково провести освітлення витяжки в разі забарвлених (мутних) екстрактів. Для цього в теплу, не доведену до остаточного обсягу витяжку додати по краплях 10% розчин оцтовокислого свинцю до припинення утворення осаду. Зазвичай на витяжку, отриману з наважки 10 г, необхідно додати 0,5 – 2 мл розчину оцтовокислого свинцю. Надлишку солі свинцю слід уникати, так як він проходить через фільтр і заважає ходу аналізу. Освітлену витяжку відфільтрувати і довести об'єм водою до 50 мл.
2. Визначення відновлюючих цукрів
Для визначення вмісту відновлюючих цукрів попередньо слід приготувати розчин гліцерату міді. Для цього необхідно зробити суміш (2:1) розчинів № 1 (0,8% CuSO4×5H2O) і № 2 (15% NaOH з додаванням 1 мл гліцерину).
Відібрати 1 мл освітленої відфільтрованої витяжки в пробірку, додати 15 мл гліцерату міді, перемішати і нагрівати на водяній бані при 70°С 6 хв. Потім пробірку охолодити в холодній воді і відібрати прозору рідину в кювету для визначення оптичної щільності розчину (проба 1).
3. Визначення суми відновлюючих і невідновлюючих цукрів (сахарози)
Для визначення вмісту невідновлюючих цукрів відібрати 0,5 мл освітленої відфільтрованої витяжки, додати 0,5 мл 1% НСl, перемішати і поставити на киплячу водяну баню на 15 хв. Після закінчення зазначеного часу додати 15 мл гліцерату міді і нагрівати на водяній бані рівно 6 хв. Охолодити пробірку в холодній воді, дати витяжці відстоятися і відібрати прозору рідину для оптичного аналізу (проба 2). У цій пробі визначається сума відновлюючих цукрів і сахарози.
4. Спектрофотометрія
Оптичну щільність досліджуваних розчинів необхідно реєструвати на спектрофотометрі при довжині хвилі λ=582 нм. Вміст цукрів у пробах можна визначити за калібрувальною кривою, побудованою по глюкозі. Для цього необхідно приготувати 50 мл розчину, який містить 10 мг/мл глюкози, і потім методом розбавлення отримати решту розчини згідно з таблицею:
-
№
Вміст глюкози, мг/мл
Кількість вихідного розчину глюкози, мл
Кількість
води, мл
Оптична щільність, D582
1
0,5
0,5
9,5
2
1,0
1,0
9,0
3
2,5
2,5
7,5
4
5,0
5,0
5,0
5
7,5
7,5
2,5
6
10,0
10,0
0
Для визначення оптичної щільності (D582) цих розчинів попередньо провести реакції з гліцератом міді, аналогічно досвідченим зразкам.
Кількість відновлюючих цукрів в досліджуваному об'єкті (А,%) обчислити за формулою:
де с – вміст цукрів в пробі 1, знайдений за калібрувальною кривою; V – об'єм витяжки, отриманої з наважки; m – маса наважки в грамах.
За цієї ж формулою розрахувати суму відновлюючих цукрів і сахарози, підставляючи замість с вміст цукрів у пробі 2, знайдений за калібрувальною кривою. Різниця між другим і першим визначеннями, помножена на коефіцієнт 0,95, дає вміст сахарози в досліджуваному об'єкті.
Результати оформити в таблицю.
Об'єкт |
D582 проба 1 |
D582 проба 2 |
Кількість відновлюючих цукрів, мг/г |
Сума моно- і олігосахаридів, мг/г |
Кількість сахарози, мг/г |
|
|
|
|
|
|
Зробити висновки.