
- •Передмова
- •Правила роботи в біохімічній лабораторії
- •Правила техніки безпеки при роботі в біохімічній лабораторії
- •Хід роботи
- •1. Екстракція цукрів водою
- •2. Визначення відновлюючих цукрів
- •3. Визначення суми відновлюючих і невідновлюючих цукрів (сахарози)
- •4. Спектрофотометрія
- •Лабораторна робота № 2 Фотоколориметричне визначення тріоз у рослинному матеріалі (за г.Н. Чупахіною, м.В. Куркиною)
- •Хід роботи
- •Обчислення результатів
- •Приклад обчислення
- •Лабораторна робота № 3 Порівняльна оцінка фізико-хімічних властивостей рослинних олій на підставі визначення кислотного і йодного чисел і числа омилення
- •Хід роботи
- •1. Визначення кислотного числа
- •2. Визначення числа омилення
- •3. Визначення йодного числа
- •Лабораторна робота № 4 Визначення вмісту білка в насінні і у вегетативній масі різних культур
- •Хід роботи
- •1. Виділення сумарних білків з насіння зернових і зернобобових рослин
- •2. Спектрофотометричний метод визначення сумарних білків
- •3. Виділення білків з вегетативних органів рослин
- •4. Визначення білків за методом Лоурі
- •Лабораторна робота № 4 Клейковина, її склад і властивості. Визначення кількості та якості сирої клейковини зерна пшениці
- •1. Визначення кількості сирої клейковини
- •Лабораторна робота № 6 Спектрофотометричне визначення нуклеїнових кислот
- •Хід роботи
- •Приклад розрахунку
- •Лабораторна робота № 7 Ферменти, як біологічні каталізатори. Якісні реакції на ферменти
- •1. Відкриття амілази в слині
- •2. Відкриття пероксидази (донор: н2о2 – оксидоредуктаза; кф 1.11.1.7) в картоплі
- •3. Відкриття тирозинази (о-дифенол: о2–оксидоредуктаза; кф 1.10.3.1) у картоплі
- •4. Вплив температури на активність амілази слини
- •5. Вплив рН середовища на активність ферментів
- •Лабораторна робота № 8 Визначення вмісту вільних органічних кислот і кислих солей в плодах методом титрування
- •Хід роботи
- •Лабораторна робота № 9 Колориметричне визначення нітратів (за д. Катальдо та ін.)
- •Хід роботи
- •Лабораторна робота № 10 Колориметричне визначення аскорбінової кислоти в рослинних продуктах
- •Хід роботи
- •Лабораторна робота № 11 Визначення вітамінів в1 і в2 в рослинах
- •Хід роботи
- •1. Екстракція вітамінів
- •2. Одержання тіохрому
- •3. Флуоресцентна спектроскопія розчинів тіохрому і рибофлавіну
- •4. Кількісне визначення вітамінів в1 і в2
- •Лабораторна робота № 12 Виділення l-ментолу з перцевої м'яти
- •Хід роботи
- •Лабораторна робота № 13 Виділення теоброміну і кофеїну з плодів какао та листя чаю. Якісні реакції на алкалоїди
- •1. Виділення теоброміну з какао
- •Хід роботи
- •2. Виділення кофеїну з листя чаю
- •Хід роботи
- •Методична література
- •Розділ II програма курсу «біохімія рослин»
- •Основна література
- •Рекомендована література
- •Реферати і есе
- •Запитання для підготовки
- •Тестові завдання
- •Рекомендована література
- •Реферати та есе
- •Запитання для підготовки
- •Тестові завдання
- •Рекомендована література
- •Реферати та есе
- •Запитання для підготовки
- •Тестові завдання
- •Рекомендована література
- •Реферати та есе
- •Запитання для підготовки
- •Тестові завдання
- •Рекомендована література
- •Реферати та есе
- •Запитання для підготовки
- •Тестові завдання
- •Рекомендована література
- •Реферати та есе
- •Запитання для підготовки
- •Тестові завдання
- •Рекомендована література
- •Реферати та есе
- •Запитання для підготовки
- •Тестові завдання
- •Рекомендована література
Лабораторна робота № 12 Виділення l-ментолу з перцевої м'яти
Терпеноїди – кисневмісні органічні сполуки (як правило, природного походження), вуглецевий скелет яких утворений з ізопренових ланок. Терпеноїди є похідними терпенів, в деяких випадках їх вуглецевий скелет може утворюватися з поліізопренової структури шляхом переміщення або втрати вуглецевого фрагмента, як правило, метильної групи.
Особливості будови молекул терпеноїдів обумовлюють їх помітні відмінності від інших органічних сполук, які виражаються у підвищеній лабільності до ізомераціі, циклізації і полімеризації. Ізомеризація і трансформація нерідко проходить в м'яких умовах, під дією світла, кисню повітря, пари води і т.п. Через легке перегрупування вуглецевого скелета терпеноїдів російський вчений Є. Вагнер назвав їх «хімічними хамелеонами».
Терпеноїди є активними учасниками обмінних процесів, що протікають в рослинах. Деякі терпеноїди регулюють активність генів рослин, беруть участь у фотохімічних реакціях. Вуглецеві ланцюги ряду терпеноїдів є ключовими проміжними продуктами в біосинтезі стероїдних гормонів, холестерину, ферментів, вітамінів Д, Е, К, жовчних кислот.
Рослинні терпеноїди мають широкий спектр біологічної дії і тому представляють інтерес для пошуку нових лікарських препаратів.
Ментол (l-метил-4-ізопропілциклогексанол-3) – головна складова частина ефірної олії перцевої м'яти (Mentha piperita). Він давно відомий як речовина з сильним м'ятним запахом і охолоджуючою дією. Добувається ментол на заводах ефірних масел; може бути отриманий синтетично. Застосовується ментол як дезинфікуючий і місцево анестезуючий засіб; використовується в харчовій і парфумерній промисловості.
Мета роботи – якісне і кількісне виділення ментолу з листя перцевої м'яти.
Реактиви та матеріали: сухе листя перцевої м'яти 500 г, КОН 2 г, борна кислота 1 г, фенілізоціанат або α-нафтилізоціанат 0,1 г, 96%-ний етанол, діетиловий ефір, Na2SO4 (зневодн.), насичений розчин соди, петролейний ефір, 1%-ний ванілін, Н2SO4 (конц.), повітряний холодильник, вакуумний насос, масляна та водяна бані, ділильні воронки, колба Кляйзена, колби на 50 – 100 мл, пробірки, термометри, електроплитка, прилад для перегонки з водяною парою.
Хід роботи
Листя м'яти (можна скористатися м'ятною олією, також наявною у продажу) завантажують в 5 літрову колбу, встановлену на електричній плитці. Щоб відігнати ефірну олію, через всю масу пропускають сильний струмінь пари (перегонка з водяною парою). Коли на дні колби сконденсується невелика кількість води, включають плитку. Як тільки обсяг ефірної олії в приймачі перестане збільшуватися, перегонку припиняють, олію відокремлюють і зважують. Вихід до 2%.
Олію розчиняють в 50 мл спирту, додавши 2 г гідроксиду калію, суміш кип'ятять 30 хв (ментол в м’ятній олії частково міститься у вигляді складних ефірів. Лужне омилення ефірів дозволяє підвищити вихід ментолу). Потім майже повністю відганяють спирт, до залишку додають 25 мл води і 25 мл діетилового ефіру. Все це переносять в ділильну воронку.
Ефірний шар промивають невеликими порціями води до нейтральної реакції рН в промивних водах, відокремлюють і сушать над сульфатом натрію.
Після відгонки розчинника олію переносять в колбу Кляйзена, з'єднану з приймачем через короткий повітряний холодильник; додають борну кислоту (1 г на 10 г олії) і включають вакуумний насос. Коли створюється розрідження 10 – 15 мм рт. ст. (1 мм рт. Ст. = 133 Па), нагрівають колбу на водяній бані; вода, що утворюється при етерифікації ментолу борною кислотою, відганяється. Потім водяну баню замінюють масляною і повільно підвищують температуру до 200 С. Розрідження доводять до 3 мм рт. ст., при цьому відганяються всі супутники ментолу, а важко летючий ментиловий ефір борної кислоти залишається в перегонній колбі (летка частина складає близько 30% від маси вихідної олії. Вона містить лімонен, α-пінен, фелландрен, ментон і може бути використана як матеріал для розгонки на колонці, якщо тільки виділити цю фракцію з великої кількості м'ятної олії.).
Залишок переносять у круглодонну колбу ємністю 100 мл разом з невеликою кількістю етилового спирту, який використовують також для змивання зі стінок залишку; додають 2 мл насиченого розчину соди і починають відганяти з водяною парою.
Борний ефір обмилюється, і ментол переходить в дистилят. За допомогою ділильної воронки ще не застиглу олію відокремлюють від води, переносять в конічну колбу і охолоджують. Затверділий ментол перекристалізовують з петролейним ефіром. Вихід 50 – 70% від ефірної олії, tпл. 42 – 43 ; [α]20D –49 (у 20%-ному спирті).
Феніл- (або α-нафтил) уретан. У суху ампулу, підготовлену для запаювання, змішують 2 – 3 краплі ментолу з десятикратним надлишком феніл-(або α-нафтил-) ізоціанату і розбавляють 1 мл сухого петролейного ефіру. Пробірку запаюють і залишають на кілька годин. Якщо кристали уретану не виділяються, то суміш підігрівають на водяній бані. Розкривають пробірку і екстрагують уретан петролейним ефіром. Розчинник відганяють, а залишок перекристалізовують зі спирту. Температура плавлення фенілуретану L-ментолу 112 , α-нафтилуретану 120 °.
Кольорова реакція. До 1-мл насиченого водного розчину ментолу додають одну краплю 1%-ного розчину ваніліну і 1-мл концентрованої сульфатної кислоти. Після перемішування розвивається стійке фіолетово-синє забарвлення.
Результати оформити у вигляді звіту. Зробити висновки.