Хід роботи
Для кількісного визначення відновленої аскорбінової кислоти взяти наважку свіжого рослинного матеріалу масою 5 г, подрібнити і перенести в фарфорову ступку. Залити сировину 10 мл 2% метафосфорної або 1% щавлевої кислоти і швидко розтерти. Гомогенат кількісно перенести у мірну колбу на 100 мл, об'єм довести до мітки тієї ж кислотою. Вміст колби ретельно перемішати, після чого профільтрувати або відцентрифугувати 10 хв при 1000 об/хв.
З фільтрату взяти три проби по 10 мл і перенести в чисті пробірки. До кожної пробі додати 1 мл свіжовиготовленого 0,025% розчину 2,6-дихлорфеноліндофенолу. Для приготування цього розчину необхідно взяти 0,0625 г 2,6-діхлорфеноліндофенолу і розчинити в 250 мл теплої (45 °С) дистильованої води, додати 6 крапель 0,01 н лугу.
Якщо при додаванні 1 мл 2,6-дихлорфеноліндофенолу рослинна витяжка повністю знебарвлюється (це спостерігається при значній кількості аскорбінової кислоти в досліджуваному об'єкті), то її потрібно розбавити в 2 рази метафосфорною (щавлевою) кислотою.
Після додавання 2,6-дихлорфеноліндофенолу до рослинного екстракту включити секундомір, вміст пробірки ретельно перемішати і швидко залити розчин у кювету товщиною 10 мм.
Через 35 секунд визначити оптичну щільність розчину на спектрофотометрі при довжині хвилі λ = 530 нм. Як розчин порівняння використовувати суміш мета фосфорної (щавлевої) кислоти і 2,6-дихлорфенол-індофенолу (10:1).
Зміна в інтенсивності забарвлення дослідного зразка пропорційна кількості аскорбінової кислоти, що знаходиться в рослинному екстракті. Кількісний розрахунок провести за калібрувальним графіком. Для побудови калібрувального графіку необхідно:
- приготувати стандартний розчин аскорбінової кислоти концентрацією 1 мг/мл, для цього зважити 100 мг аскорбінової кислоти і розчинити в 100 мл 2% мета фосфорної (щавлевої) кислоти;
- зі стандартного розчину приготувати розведення, що містять від 1 до 100 мкг/мл аскорбінової кислоти, згідно з таблицею;
- відібрати 10 мл кожного з розчинів аскорбінової кислоти, перенести в чисті попередньо пронумеровані пробірки, додати 1 мл 2,6-дихлорфенол-індофенолу і визначити оптичну щільність цих розчинів.
№ |
Вміст аскорбінової кислоти, мкг/мл |
Кількість стандартного розчину, мл |
Кількість води, мл |
Оптична щільність розчину, D530 |
1 |
1 |
1 |
999 |
|
2 |
5 |
1 |
199 |
|
3 |
10 |
1 |
99 |
|
4 |
20 |
2 |
98 |
|
5 |
50 |
5 |
95 |
|
6 |
100 |
10 |
90 |
|
Користуючись калібрувальною кривою, знайти концентрацію аскорбінової кислоти в екстракті. Кількість аскорбінової кислоти в досліджуваному матеріалі (мкг/г сирої маси) обчислити за формулою:
де с – вміст аскорбінової кислоти в 1 мл витяжки, знайдений по каліброваною кривою; V – об'єм екстракту в мл; m – маса досліджуваного матеріалу в грамах.
Результати представити у вигляді таблиці:
Дослідження |
Маса наважки, г |
Оптична щільність розчину, D530 |
Кількість аскорбі-нової кислоти в екстракті, мкг/мл |
Кількість ас корбі-нової кислоти в об'єкті, мкг/г |
|
|
|
|
|
Зробити аналіз отриманих результатів.