Хід роботи

Визначення нітратів в рослинних тканинах здійснюють шляхом титрування саліциловою кислотою. Його можна здійснювати, як на висушеному так і сирому матеріалі. У першому випадку матеріал фіксується гарячою парою протягом 5 хвилин і досушується до постійної маси при t = 70 С. Висушений зразок подрібнюється, береться наважка масою 50 або 100 мг, заливається деіонізованою водою – 5 або 10 мл відповідно.

При визначенні нітратів в сирому матеріалі береться наважка 1 г і 6 мл води або фосфатного буфера. Гомогенат фільтрується, і фільтрат центрифугується при 3000 об./хв. 15 хвилин. Супернатант зливається і використовується для аналізу.

В аналізі використовується деіонізованої вода – вода, звільнена від іонів та катіонів. Дистилят можна брати в тому випадку, якщо він вільний від нітратів. В іншому випадку його потрібно пропустити через катіоніт, щоб звільнитися від нітратів і нітритів.

Суспензія інкубується при 45 °С 1 годину при постійному перемішуванні, далі центрифугується (5000g, 15 хв). Супернатант декантується і використовується для аналізу. У колбу Ерленмеера на 50 мл заливається 0,2 мл центрифугату і 0,8 мл 5%-ного розчину саліцилової кислоти, приготовленої на концентрованій сульфатній кислоті (використовувати сульфатну кислоту марки хч, в темній склянці розчин може зберігатися протягом 1 тижня).

Через 20 хвилин при кімнатній температурі в колбу повільно тонким струменем підливають з бюретки 19 мл 2 н NaOH. Вміст колби при цьому потрібно постійно перемішувати. За наявності у зразку нітратів з'являється стійке жовте забарвлення, стабільне протягом 48 годин. Розчин охолоджують і фотометрують при довжині хвилі 410 нм.

Як контроль використовується зразок, приготовлений так само, як дослідний, тільки замість фільтрату в нього вноситься 0,2 мл води.

Калібрувальний графік для визначення концентрації нітратів будується за KNO₃.

KNO₃ гідроскопічний, тому перед взяттям наважки його потрібно висушити в термостаті до постійної маси. При приготуванні серії розчинів з різною концентрацією KNO₃ (5 мкг/мл – 55 мкг/мл) для побудови калібрувального графіка потрібно брати їх в обсязі не більш 0,2 мл, якщо ж обсяг менше 0,2 мл, то його потрібно доводити водою до 0,2 мл.

Визначення нітратів можна вести в присутності іонів хлору (до 2%), амонію і нітритів.

Результати представити у вигляді таблиці:

Дослідження	Маса наважки, г	Оптична щільність розчину, D410	Кількість нітратів в екстракті, мкг/мл

Зробити аналіз отриманих результатів.

Лабораторна робота № 10 Колориметричне визначення аскорбінової кислоти в рослинних продуктах

Основним джерелом аскорбінової кислоти (вітамін С) для людини є рослинні продукти.

Кількісний аналіз вмісту аскорбінової кислоти являє собою певну складність, і навіть сьогодні немає універсального методу, який би не мав недоліків. Будь-який метод аналізу повинен давати можливість одночасно визначати як саму аскорбінову кислоту, так і продукти її окислення і знаходити чіткі відмінності між цими сполуками.

Найбільш поширеними методами, заснованими на використанні відновлювальних властивостей аскорбінової кислоти, є титриметричні і колориметричні методи аналізу.

В основі найбільш популярного титриметричного методу аналізу аскорбінової кислоти лежить реакція її взаємодії з 2,6-дихлорфенол-індофенолом. Ця сполука при нейтральних значеннях рН утворює синє забарвлення, при кислих – рожеве, а при взаємодії з аскорбіновою кислотою утворює безбарвний продукт. На жаль, даний метод чутливий до присутності інших відновників – іони металів, редукуючі цукри, таніни та ін. Крім того, при титруванні рослинних витяжок є деякі труднощі з визначенням його завершення.

Нижче представлена методика, заснована на фотометричному визначенні надлишку 2,6-дихлорфеноліндофенолу після відновлення певної його частини аскорбіновою кислотою. Оптична щільність зафарбованого розчину визначається суворо через 35 секунд після додавання в рослинну витяжку барвника, що дає можливість повністю виключити помилки, можливі при титриметричному аналізі аскорбату.

Мета цієї роботи – визначити кількість аскорбінової кислоти в різних рослинних продуктах (овочі, фрукти, ягоди).

Реактиви та матеріали: дистильована вода, 2% метафосфорна або 1% щавлева кислота, аскорбінова кислота, 2,6-дихлорфеноліндофенол, NaOH чи KOH, порцелянова ступка і товкач, воронка, паперові фільтри, мірна колба об'ємом 100 мл, мірний циліндр, пробірки, секундомір, спектрофотометр.