- •Физиология микроорганизмов
- •Задача 2. Охарактеризовать функции основных химических соединений бактериальной клетки.
- •Задача 3. Охарактеризовать типы питания бактерий.
- •Задача 4. Охарактеризовать получение энергии у фотоавтотрофов, хемоавтотрофов, хемо(органо)гете-ротрофов.
- •Задача 5. Дать понятия прото- и ауксотрофности.
- •Задача 6. Охарактеризовать механизмы переноса питательных веществ в бактериальную клетку.
- •Задача 7. Описать условия культивирования бактерий.
- •Задача 8. Привести классификацию и дать характеристику различным питательным средам.
- •Задача 9. Описать приготовление искусственных питательных сред.
- •Задача 10. Дать понятие чистой культуры, колонии, клона, штамма.
- •Задача 11. Описать принципы выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.
- •3. 2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •4. Занятие № 2. Рост, размножение и дыхание бактерий. Пигменты бактерий. Выделение чистой культуры аэробов (II этап). Принципы культивирования анаэробов.
- •4.1. Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения. Задача 1. Охарактеризовать механизм и скорость размножения бактерий.
- •Задача 2. Охарактеризовать особенности роста и размножения бактерий в жидких и на плотных питательных средах.
- •Задача 3. Охарактеризовать образование микробами пигментов и других специфических веществ.
- •Задача 4. Охарактеризовать аэробный и анаэробный типы дыхания бактерий.
- •Задача 5. Охарактеризовать методы создания бескислородных условий для культивирования анаэробов.
- •4.2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •5. Занятие № 3. Ферменты бактерий. Выделение чистой культуры аэробов (III этап). Методы выделения чистых культур анаэробов.
- •5.1. Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения. Задача 1. Охарактеризовать ферменты бактерий и их роль в жизнедеятельности бактерий.
- •Задача 2. Привести классификации ферментов бактерий.
- •Задача 3. Охарактеризовать методы идентификации бактериальных культур по биохимическим (ферментативным) признакам.
- •Задача 4. Охарактеризовать методы изучения сахаролитических свойств бактериальных культур.
- •Задача 5. Охарактеризовать методы изучения протеолитической активности бактерий.
- •Задача 6. Охарактеризовать использование микробных ферментов в медицине и пищевой промышленности.
- •Задача 7. Охарактеризовать методы выделения чистой культуры анаэробов. Для этого надо знать:
- •5.2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •6. Занятие № 4. Тема: культивирование вирусов, риккетсий и хламидий.
- •6.1. Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения. Задача 1. Описать способы культивирования вирусов.
- •Задача 2. Описать культивирование вирусов в курином эмбрионе.
- •Задача 3. Описать тканевые культуры для культивирования вирусов.
- •Задача 4. Описать способы обнаружения вирусов в тканевой культуре.
- •Задача 5. Описать методы определения концетрации вирионов.
- •Задача 6. Описать особенности культивирования риккетсий и хламидий.
- •6.2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •Основная литература:
- •Дополнительная литература:
- •Контрольные вопросы
Задача 9. Описать приготовление искусственных питательных сред.
Для этого надо знать:
1. МПБ готовят на мясной воде. 1 кг мясного фарша заливают 2 л водопроводной воды (она содержит минеральные соли в необходимом для бактерий количестве) и настаивают 24 часа в прохладном месте. Настой кипятят 1 час, остужают, фильтруют до прозрачности, разливают в бутыли и стерилизуют в автоклаве.
К мясной воде добавляют 1 % пептона, 0,5 % NaCl (для создания изотоничности), устанавливают рН (для большинства рН = 7,2-7,6). Затем кипятят 30 мин, добавляют дистиллированную воду до первоначального объема, фильтруют, еще раз устанавливают рН, разливают по пробиркам и колбам и стерилизуют в автоклаве при 120 С.
2. МПА готовят на основе МПБ. К МПБ добавляют 1,5-2 % сухого агара, кипятят до его полного растворения, фильтруют в горячем виде, проверяют рН, разливают по пробиркам и колбам и стерилизуют в автоклаве при 120 С.
Для получения большей поверхности культивирования готовят так называемый косой агар. Для этого пробирки сразу после стерилизации укладывают остывать в наклонном положении. При остывании агар отдает конденсационную воду, собирающуюся внизу пробирки.
3. ПВ – наиболее простая по химическому составу питательная среда. Для приготовления этой среды 1 % пептона и 0,5 % NaCl растворяют в дистиллированной воде, фильтруют и стерилизуют в автоклаве при 120 С.
4. Сложные питательные среды готовят на основе простых. Сахарные среды готовят, добавляя к МПБ или МПА 1 % глюкозу. Стерилизуют в аппарате Коха при 100 С дробным методом.
Сывороточные среды готовят, добавляя к МПБ или МПА 10-20 % стерильной сыворотки (бычьей, лошадиной и др.). МПА предварительно расплавляют на кипящей водяной бане, а затем остужают до 45-50 С и добавляют сыворотку. Сывороточные среды нельзя подвергать стерилизации, и необходимо контролировать их стерильность (ставят в термостат на 3 дня).
Для приготовления кровяного агара стерильно взятую дефибринированную кровь (кролика, барана и др.) прибавляют к стерильному расплавленному и остуженному до 45 С МПА в количестве 5-20 %, тщательно перемешивают, избегая образования пузырьков, разливают в стерильные чашки Петри или пробирки. Среду также нельзя подвергать стерилизации.
5. Приготовление других сред осуществляется по специальным рецептам. Дифференциально-диагностические среды из сухих порошков готовят следующим образом: навеску среды растворяют в дистиллированной воде и после 5-минутного кипячения разливают в стерильные чашки Петри.
6. Для контроля стерильности среды помещают в термостат при 37 С на 5 суток. Жидкие среды должны быть прозрачными, а на поверхности и в толще плотных питательных сред не должны появляться признаки роста.
Проводят также химический контроль сред (проверяют рН, содержание общего и аминного азота, хлоридов) и биологический контроль (изучают рост лабораторной культуры того микроорганизма, для которого приготовлена среда). Только после того, как среды выдержали контроль, их можно использовать по назначению.
Задача 10. Дать понятие чистой культуры, колонии, клона, штамма.
Для этого надо знать:
1. Чистая культура микроорганизмов – это популяция клеток (видимый рост) одного вида, выросшая на стерильной питательной среде.
2. При размножении бактерий на плотной питательной среде можно наблюдать образование колоний. Колония – это макроскопическое скопление бактериальных клеток, которые являются потомством одной бактериальной клетки. Следовательно, все клетки, входящие в состав одной колонии, принадлежат к одному виду. Колонии различаются по размеру, форме, строению, консистенции и цвету. Внешний вид колоний характерен для определенного вида бактерий.
3. В микробиологии широко применяются термины "штамм" и "клон". Штаммы – это разные микробные культуры одного вида, выделенные из различных источников или даже из одного и того же источника, но в разное время. Штаммы одного вида могут быть совершенно идентичными или различаться по отдельным признакам (устойчивость к антибиотику, ферментация какого-либо сахара и т.д.). Если возбудитель выделен из воды, говорят о водном штамме; из испражнений – фекальном штамме. Вирус гриппа, выделенный в Гонконге, получил название "штамм Гонконг", а в Сингапуре – "штамм Сингапур". Часто штаммы обозначают протокольными номерами.
4. В научно-исследовательской работе, особенно при генетических исследованиях, необходимо получать культуру заведомо из одной клетки. Такая культура называется клоном. Для ее получения пользуются микроманипулятором. Это прибор, снабженный инструментами (иглами, пипетками) микроскопических размеров. С помощью держателя под контролем микроскопа их вводят в препарат "висячая капля" и нужную клетку (одну!) переносят в питательную среду. Она размножается и образует клон генетически идентичных клеток.