- •Физиология микроорганизмов
- •Задача 2. Охарактеризовать функции основных химических соединений бактериальной клетки.
- •Задача 3. Охарактеризовать типы питания бактерий.
- •Задача 4. Охарактеризовать получение энергии у фотоавтотрофов, хемоавтотрофов, хемо(органо)гете-ротрофов.
- •Задача 5. Дать понятия прото- и ауксотрофности.
- •Задача 6. Охарактеризовать механизмы переноса питательных веществ в бактериальную клетку.
- •Задача 7. Описать условия культивирования бактерий.
- •Задача 8. Привести классификацию и дать характеристику различным питательным средам.
- •Задача 9. Описать приготовление искусственных питательных сред.
- •Задача 10. Дать понятие чистой культуры, колонии, клона, штамма.
- •Задача 11. Описать принципы выделения и идентификации чистых культур микроорганизмов.
- •3. 2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •4. Занятие № 2. Рост, размножение и дыхание бактерий. Пигменты бактерий. Выделение чистой культуры аэробов (II этап). Принципы культивирования анаэробов.
- •4.1. Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения. Задача 1. Охарактеризовать механизм и скорость размножения бактерий.
- •Задача 2. Охарактеризовать особенности роста и размножения бактерий в жидких и на плотных питательных средах.
- •Задача 3. Охарактеризовать образование микробами пигментов и других специфических веществ.
- •Задача 4. Охарактеризовать аэробный и анаэробный типы дыхания бактерий.
- •Задача 5. Охарактеризовать методы создания бескислородных условий для культивирования анаэробов.
- •4.2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •5. Занятие № 3. Ферменты бактерий. Выделение чистой культуры аэробов (III этап). Методы выделения чистых культур анаэробов.
- •5.1. Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения. Задача 1. Охарактеризовать ферменты бактерий и их роль в жизнедеятельности бактерий.
- •Задача 2. Привести классификации ферментов бактерий.
- •Задача 3. Охарактеризовать методы идентификации бактериальных культур по биохимическим (ферментативным) признакам.
- •Задача 4. Охарактеризовать методы изучения сахаролитических свойств бактериальных культур.
- •Задача 5. Охарактеризовать методы изучения протеолитической активности бактерий.
- •Задача 6. Охарактеризовать использование микробных ферментов в медицине и пищевой промышленности.
- •Задача 7. Охарактеризовать методы выделения чистой культуры анаэробов. Для этого надо знать:
- •5.2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •6. Занятие № 4. Тема: культивирование вирусов, риккетсий и хламидий.
- •6.1. Задачи для самоподготовки с алгоритмами решения. Задача 1. Описать способы культивирования вирусов.
- •Задача 2. Описать культивирование вирусов в курином эмбрионе.
- •Задача 3. Описать тканевые культуры для культивирования вирусов.
- •Задача 4. Описать способы обнаружения вирусов в тканевой культуре.
- •Задача 5. Описать методы определения концетрации вирионов.
- •Задача 6. Описать особенности культивирования риккетсий и хламидий.
- •6.2. Вопросы и упражнения для самоподготовки.
- •Основная литература:
- •Дополнительная литература:
- •Контрольные вопросы
Задача 4. Описать способы обнаружения вирусов в тканевой культуре.
Для этого надо знать:
1. После внесения вируса (заражения) в тканевую культуру он проникает в клетки, в которых интенсивно репродуцируется, повреждая клетки.
2. Репродукцию вирусов в культуре клеток можно обнаружить по следующим признакам:
а) цитопатическое действие (ЦПД) – наблюдаются морфологические изменения клеток (вакуолизация цитоплазмы, деструкция митохондрий, округление клеток), при этом часть из них погибает и отслаивается от поверхности стекла, в результате вместо сплошного клеточного монослоя остаются лишь отдельные клеточные островки; ЦПД обнаруживается микроскопически (8) и служит не только для обнаружения, но и для идентификации вирусов, поскольку характер цитопатических изменений для разных вирусов неодинаков; например, вирус полиомиелита вызывает мелкозернистую деструкцию клеток; аденовирусы вызывают образование скоплений клеток в виде виноградных гроздьев; вирус кори вызывает образование симпластов – многоядерных клеток;
б) образование включений в клетках культуры – в ядре или цитоплазме образуются скопления вирусных частиц, имеющие различную форму и размеры (от 0,25 до 25 мкм); они могут быть выявлены в препаратах, приготовленных из ткани и окрашенных по Романовскому-Гимзе или флюорохромами;
в) способность к гемадсорбции – инфицированная культура клеток способна адсорбировать эритроциты, что хорошо видно под микроскопом; вирусы выходят на поверхность клеток, в которых они репродуцировались и связывают эритроциты, что позволяет судить о репродукции вирусов даже при отсутствии ЦПД; взвесь эритроцитов добавляют в культуру и после некоторого контакта промывают физиологическим раствором; на поверхности пораженных вирусами клеток остаются прилипшие эритроциты в виде разнообразных фигур;
г) реакция гемагглютинации – скучивание эритроцитов кур, гусей, морских свинок под влиянием вирусов, содержащих в своей оболочке гемагглютинин (см. выше); их обнаруживают в культуральной жидкости клеточной культуры;
д) "цветная" реакция – клетки выращиваются на среде с индикатором (метиленовым красным), который изменяет цвет (с красного на желтый) под влиянием кислых продуктов метаболизма при росте незараженных клеток; при репродукции вируса нарушается нормальный метаболизм, рН не сдвигается и сохраняется первичный (красный) цвет среды.
Задача 5. Описать методы определения концетрации вирионов.
Для этого надо знать:
1. Проводят определение количества вирионов в 1 мл среды (титр вируса).
2. Используется 2 метода:
а) титрование по ЦПД: клетки культуры заражают 10-кратным разведением вируса; после 6-7-дневной инкубации просматривают на наличие ЦПД; за титр вируса принимают наибольшее разведение, которое вызывает ЦПД в 50 % зараженных культур; титр выражают количеством цитопатических доз (ЦПД50);
б) метод "бляшек": культуру клеток заражают вирусом и покрывают тонким слоем агара, что ограничивает распространение вирусов после выхода их из клетки, и инфицируются только соседние клетки; после инкубирования посевов в течение нескольких суток на агаровом покрытии появляются "стерильные пятна" – просветленные участки определенной формы – участки погибших клеток в сплошном монослое клеточной культуры – "бляшки". Считается, что одна "бляшка" – потомство одной вирусной частицы; она хорошо заметна в виде светлого круглого участка на красном фоне клеток, прижизненно окрашенных нейтральным красным; титр вируса выражают числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл. Размеры, форма и сроки появления отличаются у разных видов вирусов и штаммов, что используется для идентификации.