Тема: Микробиологическая диагностика инфекций, вызываемых спорообразующими анаэробными бактериями.

Провести выделение и идентификацию культуры возбудителя, выделенной из глубины раны с подозрением на газовую гангрену.

Микроскопия материала из раны, окраска по Граму, х100	Микроскопия чистой культуры C. рerfringens, окраска по Граму, х100
Результат:	Результат:
РИФ с меченными АТ к C. perfringens	СЭМ. Морфология C. perfringens, х15000
Результат:

Бактериологическое исследование по выделению и идентификации предполагаемого возбудителя с целью установления этиологии заболевания:

Укажите методы отбора и доставки материала при подозрении на анаэробную инфекцию : _____________________________________________________________________________

1 этап. Посев исследуемого материала на среды культивирования, укажите какие:________________

Посев исследуемого материала на среду Вильсона-Блера и молоко

Ориентировочный ответ о наличии C. perfringens – через 2-4 ч культивирования.

Контроль(-) Образец	Образец Контроль (-)
На среде Вильсона-Блера отмечают почернение среды ввиду восстановления сульфата натрия и образования сульфида железа	На среде с лакмусовым молоком образуется сгусток, пронизанный пузырьками газа.

2 этап. Оценка посева исследуемого материала на СКС или какую-либо среду для выделения анаэробов (анаэробный кровяной агар, среда Китта-Тароцци и т. д.) визуально и микроскопией препаратов, окрашенных по Граму.

Отсев характерных колоний на плотную питательную среду с целью получения и накопления изолированных колоний. Чашки инкубируют в анаэробных условиях.

Оценка результатов посевов:	Микроскопия выделенной культуры, окраска по Граму, х100
На среде СКС___________________________. На кровяном агаре колони:________________.	При микроскопии выявлены крупные грамположительные палочки, образующие споры, превышающие диаметр клетки и занимающие субтерминальное или центральное расположение (споры не окрашены).

3 этап. Характерные колонии отсевают на соответствующие питательные среды для выделения и накопления чистой культуры.

4 этап. Полученная чистая культура подлежит идентификации.

Свойства и методы, позволяющие определить видовую принадлежность. Идентификацию чистых культур (до вида микроор­ганизма) проводят с учётом морфологических, тинкториальных, культуральных, биохимичес­ких, токсигенных и антигенных свойств микроорганизма. Методы идентификации: культуральная диагностика, РИФ, ПЦР, биохимический метод («пестрый ряд»), биологический (РН) и др.

Оценка посева культуры на «пестрый ряд»	Обнаружение токсина. Тест на лецитиназную активность
Оценка: каталаза (-), разжижение желатина (+), индол (-), глюкоза (+), лактоза (+), сахароза (+), мальтоза (+), пептонизация молока (+), H2S(+), подвижность (-)	1 3 2 Образец 2,3 Контроль(-)

Проведите идентификацию выделенной культуры по таблице (ниже). Результат________________

5 этап. Оценка результата реакции нейтрализации (РН) на белых мышах с центрифугатом культуральной жидкости и противогангренозными антитоксическими сыворотками.

Для определения токсигенности культуры путем постановки РН смесь центрифугата исследуемой культуры с антитоксическими сыворотками вводят подкожно белым мышам. В случае нейтрализации токсина животные остаются живыми; при отрицательной РН – животные погибают.

№	Введено животным		Результат
	культуральная жидкость	антитоксическая сыворотка
1.	+	противоперфрингенс	Мыши живы
2.	+	противонови	Мыши пали
3.	+	противосептикум	Мыши пали
4.	+	противогистолитикум	Мыши пали
5.	+	противосорделлии	Мыши пали
6.	+	--	Мыши пали