С помощью антирезусной сыворотки

	Наличие агглютинации
Резус принадлежность	Сыворотка антирезусная	Контроль - сыворотка АВ(IV) группы
Резус (+)	+	-
Резус (-)	-	-

Примечание: (+) - есть агглютинация, (–) - нет агглютинации

2. Лабораторные методы определения резус принадлежности

1) агглютинация в солевой среде. Для постановки реакции используют сыворотки содержащие полные антирезусные антитела класса JgM. На плоскости производят смешивание 2% взвеси эритроцитов пациента с антирезусной сывороткой и выдерживают при температуре 37* в течение часа. После этого производят микроскопию осадка. Положительная реакция устанавливается при наличии осадка в виде нитей или зернистости. Отрицательная реакция устанавливается при наличии ровного правильного круга на дне лунки.

2) агглютинация в присутствии желатина. В ходе постановки реакции к 1-2 каплям исследуемых эритроцитов добавляют 2 капли антирезусной сыворотки и 2-3 капли 10% желатина. Далее пробирку помещают на водяную баню при температуре 45-48* на 15-20 минут. После этого в пробирку добавляют 8-10 мл 0,9% натрия хлорида и слегка покачивают пробирку в сторону на 45-50*. Пожительная реакция устанавливается при наличии видимой невооружённым глазом агглютинации.

3) реакция Кумбса – непрямой антиглобулиновый тест. Данная реакция позволяет выявить неполные АТ к ауто- и изоантигенам Эр. Для этого в ходе реакции используют антиглобулиновую сыворотку, которая содержит антитела к иммуноглобулину человека (антитела к антителам).В ходе постановки реакции к отмытым эритроцитам, которые не содержат на своей поверхности антител добавляют антирезусную сыворотку и после этого инкубируют пробирку при 37* в течение 20 минут. После этого производят повторное отмывание эритроцитов, в ходе которого остаются только эритроциты и осевшие на их поверхность антирезусные антитела. На следующем этапе в лунку планшета вносят 1 каплю таких эритроцитов и добавляют 1 каплю антиглобулиновой сыворотки. При наличии фиксированных антител происходит видимая агглютинация, что говорит о резус положительной принадлежности крови. В том случае, если агглбтинации не произошло – резус принадлежность отрицательная.

4) реакция с моноклональными анти - D антителами. В ходе постановки реакции в лунку планшета вностят одну каплю моноклональных анти-D антител и добавляют в 10 раз меньшую каплю крови пациента. После смешивания наблюдают за реакцией в течение 3 минут. Резус принадлежность - положительная при наличии агглютинации, а отрицательная - при отсутствии реакции.

Возможные ошибки при определении резус принадлежности

Ошибки при постановке реакций могут быть связаны с неправильным соотношением сыворотки и эритроцитов, с сокращением времени наблюдения, при оценке результата по высыхающей капле, при определении резус-фактора в гемолизированной крови, при использовании неактивных, просроченных или испорченных сывороток. Биологические аспекты ошибочной диагностики резус фактора могут быть обусловлены снижением агглютинабельности резус антигенов эритроцитов при заболеваниях печени, почек, крови, а также при наличии неспецифической агглютинации.