Питательные среды для культивирования лептоспир

• водно-сывороточная среда Уленгута (водопроводную воду стерилизуют, добавляют свежую инактивированную при +56 0С 30 мин. кроличью сыворотку);

• среда Форварта-Вольфа (дистиллированная вода, хлористый натрий, пептон, фосфорная (буферная смесь). Перед посевом в пробирки со средой добавить инактивированную кроличью сыворотку;

• полужидкая агаровая среда (вода, агар-агар, кипятить 30 мин., разлить в пробирки, стерилизовать кипячением 30 мин., добавить стерильную сыворотку кролика, подогреть при 56 ⁰С 30 мин. для инактивации;

• среда Терских - для исследования воды на наличие лептоспир (к исследуемой воде добавить фосфатно-буферную смесь, желток свежего куриного яйца, расплавленный слабощелочной мясо-пептонный агар).

Приложение 3

Культивирование грибов

Питательные среды для культивирования грибов:

1. Неселективные среды:

• пивное сусло (неопохмеленное сусло стерилизуют при 110 ⁰С 30 минут, затем используют его для приготовления:

а) сусло жидкое (разводят водой),

б) среда Сабуро жидкая (вода, глюкоза, пептон),

в) сусло-агар (добавляют 2-3% агар-агара);

• среда Сабуро плотная (агар, пептон, глюкоза, мальтоза, вода),

• рисовая среда Левиной (варят цельный рис, разбавляют водой, фильтруют, добавляют агар-агар),

• среда Левина (МПА, лактоза, эозин, метиленовая синь),

• среда Эндо (МПА, лактоза, кислый фуксин, обесвеченный щелочью),

- картофельно-глюкозный агар (отваренный в течение 1 часа картофель растирают, разбавляют водой, процеживают, добавляют глюкозу и агар),

• МПА с 2% глюкозой,

• желатиновая среда (в бульон на отваре сердечной мышцы быка добавляют желатин),

• 5-10% КА (агар, дополненный экстрактом сердца и мозга),

• асцитический агар (агар, асцитическая жидкость).

2. Селективные среды, дополненные одним или комплексом антибиотиков: пенициллином (20 ЕД/мл), стрептомицином (40 ЕД/мл) или гентамицином (0,5 мкг/мл), левомицитином (16 мг/мл).

Приложение 4

ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКОПЛАЗМ

1. 2% сердечно-мозговой агар.

2. Мясо-пептонный бульон с 30% сывороткой крови или асцитической жидкости.

В среды добавляют нативную сыворотку, углеводы, витамины, соли, а для угнетения роста сопутствующих бактерий - пенициллин и ацетат калия.

Для культивирования уреаплазм используют среды, содержащие гидролизат бычьего сердца, гидролизат казеина, пекарские дрожжи и красители: кристаллический и бромтимоловый синий. Среды дополняют 10% лошадиной сывороткой, 0,05% мочевины, 2% а-цистеина и антибиотиков (пенициллин).

Рост в виде яичницы-глазуньи.

Приложение 5

Культивирование простейших

1. Среда NNN (3 N - Нови, Ниль, Николь): вода, поваренная саль, агар-агар, дефибринированная кровь кролика.

2. Для размножения лейшманий - среда 3 N модифицированная (свежую кровь заменяют переваром или разведенной сывороткой крови человека).

3. Для выделения чистой культуры трихомонад - обрабатывают материал пенициллином и стрептомицином (для устранения бактерий), добавляют нистатин (для устранения дрожжевых грибов).

Затем засевают материал на одну из сред:

• МПБ с 1% глюкозой и 5% лошадиной сыворотки. После посева среду сверху заливают вазелиновым маслом.

• Среда Т (печеночный бульон, раствор Рингера, пептон, агар-агар, цистеин солянокислый. После стерилизации добавляют мальтозу, инактивированную сыворотку человека или асцитическую жидкость).

Приложение 6