Исследование ферментативных свойств желудочного сока

За сутки у человека выделяется 2–2,5 л желудочного сока рН 1,5–1,8. Главным неорганическим компонентом желудочного сока является соляная кислота, способствующая денатурации и набуханию белков; создающая кислую среду, необходимую для действия ферментов желудочного сока; активирующая пепсиногены и превращающая их в пепсины; способствующая нормальной эвакуации пищи из желудка; возбуждающая панкреатическую секрецию. Основными ферментами желудочного сока являются протеолитические ферменты: пепсины, гастриксин, ренин (химозин), главную роль среди которых играют пепсины. Кроме того, в желудочном соке имеется малоактивная липаза, расщепляющая только эмульгированные жиры.

Для работы необходимы: водяная баня или термостат, спиртовка, штатив с пробирками, пинцет, натуральный желудочный сок, фибрин или вареные мышцы лягушки, 0,5%-ный раствор НС1, 0,5%-ный раствор NaHСО₃, стеклограф, лакмусовая бумага.

Проведение работы. Нумеруют четыре пробирки и наливают: в первую пробирку 2 мл желудочного сока; во вторую – 2 мл желудочного сока и кипятят ее на спиртовке; в третью – 2 мл желудочного сока и добавляют раствор соды до получения слабощелочной реакции (до синеватого окрашивания красной лакмусовой бумаги); в четвертую – 2 мл 0,5%-ного раствора НС1. Во все пробирки кладут одинаковое количество фибрина (0,1–0,3 г) и помещают их на 30–40 мин в водяную баню или термостат при температуре 38 ^оС.

Результаты работы и их оформление. Через 30–40 мин пробирки извлекают из термостата и определяют, как изменились кусочки фибрина во всех пробирках. Результаты опыта заносятся в следующую таблицу:

№ пробирок	Содержимое пробирок	Состояние кусочков фибрина	Причины изменения фибрина в пробирках
1	2 мл желудочного сока + фибрин
2	2 мл кипяченого желудочного сока + фибрин
3	2 мл желудочного сока + раствор NaHСО3
4	2 мл 0,5%-ного раствора НС1 + фибрин

Р а б о т а 5

Исследование ферментативной активности сока поджелудочной железы

За сутки у человека выделяется 1,5–2,0 л панкреатического сока рН 7,8–8,5.

В состав панкреатического сока входят протеолитические (трипсиноген, химотрипсиноген, прокарбоксипептидазы А и В, проэластаза), липолитические (липаза, фосфолипаза А и эстераза), амилолитические (-амилаза, мальтаза) ферменты и нуклеазы (рибонуклеаза и дезоксирибонуклеаза), расщепляющие белки, жиры, углеводы и нуклеиновые кислоты. Протеолитические ферменты секретируются в виде проэнзимов. Под влиянием энтерокиназы двенадцатиперстной кишки трипсиноген превращается в трипсин, который активирует и другие пропептидазы. Панкреатическая липаза активна в присутствии солей желчных кислот.

Для работы необходимы: водяная баня или термостат, спиртовка, штатив с пробирками, бюретки, сок поджелудочной железы, желчь, фибрин, крахмал – вареный и сырой, масло растительное, фенолфталеин, раствор Люголя, бромная вода (4%-ный раствор брома в воде), 0,01 н. раствор NаОН, стеклограф. Вместо сока поджелудочной железы можно использовать панкреатин (1 г растворяют в 250 мл 0,3%-ного раствора NаНСО₃), но активность его ферментов может быть ниже, чем у натурального сока поджелудочной железы.

Проведение работы. Нумеруют девять пробирок и в каждую наливают по 2 мл активированного поджелудочного сока (активацию поджелудочного сока в условиях лаборатории проводят добавлением к нему кишечного сока или соскоба слизистой оболочки кишечника). Затем в первую пробирку опускают кусочек фибрина; содержимое второй кипятят, охлаждают и опускают в нее кусочек фибрина; в третьей подкисляют поджелудочный сок соляной кислотой и добавляют кусочек фибрина; в четвертую добавляют 2 мл вареного крахмала; в пятую – щепотку сырого крахмала; поджелудочный сок в шестой пробирке кипятят, охлаждают и добавляют 2 мл вареного крахмала; в седьмую добавляют 0,3 мл желчи и 2 мл растительного масла; в восьмую – 2 мл растительного масла; поджелудочный сок в девятой кипятят и добавляют 0,3 мл желчи и 2 мл растительного масла. Все пробирки помещают на 30 мин в термостат или водяную баню при температуре 38–40 ^оС.

После прогревания пробирки охлаждают и проводят следующие реакции. К содержимому первых трех пробирок добавляют бромную воду, которая в присутствии аминокислот (триптофан) дает красновато-фиолетовое окрашивание; отсутствие окрашивания указывает на то, что фибрин не переваривается. В четвертую, пятую и шестую пробирки добавляют по 1–2 капли раствора Люголя и определяют присутствие крахмала. Амилолитические ферменты поджелудочного сока расщепляют вареный и сырой крахмал, но сырой крахмал расщепляется медленнее. Это можно установить, если пробирки с поджелудочным соком и крахмалом выдерживать в термостате по 10, 20 и 30 мин. Содержимое седьмой, восьмой и девятой пробирок титруют 0,01 н. раствором NаОН в присутствии индикатора фенолфталеина и по количеству раствора, затраченного на титрование каждой пробы, судят о липолитической активности поджелудочного сока.

Результаты работы и их оформление. Составьте таблицу и внесите в нее результаты опыта.

№ про-бирок	Содержимое пробирок	Время термостатирования, мин	Реактив	Результаты опыта
1	2	3	4	5
1	Сок поджелудочной железы + фибрин	30	Бромная вода
2	Прокипяченный сок подже-лудочной железы + фибрин	30	То же
Продолжение
1	2	3	4	5
3	Подкисленный сок поджелудочной железы + фибрин	30	То же
4	а) сок поджелудочной же-лезы + вареный крахмал; б) то же; в) то же	10 20 30	Раствор Люголя То же То же
5	а) сок поджелудочной же-лезы + сырой крахмал; б) то же; в) то же	10 20 30	Раствор Люголя То же То же
6	Прокипяченный сок поджелудочной железы + вареный крахмал	30
7	Сок поджелудочной железы + желчь + растительное масло	30	0,01 н. NаОН + фенолфталеин
8	Сок поджелудочной железы + растительное масло	30	То же
9	Прокипяченный сок поджелудочной железы + рас-тительное масло + желчь	30	То же

Проанализируйте результаты опыта и сделайте выводы о влиянии сока поджелудочной железы на белки, жиры и углеводы; о его ферментативной активности в различных экспериментальных условиях.

Р а б о т а 6