Поверхностный посев исследуемого материала
В бактериологических исследованиях поверхностный посев применяют в основном для получения изолированных колоний микробов, реже - для количественного определения микроорганизмов в определенном объеме исследуемого материала (сточных водах, почвенном растворе и т.д.). Поверхностный посев производят на плотную питательную среду, разлитую в чашки, пробирки со скошенным МПА или посевные матрицы бактериальной петлей, пипеткой, шпателем (рис.5) или тампоном.
Рис. 5 Посев на плотную питательную среду в чашку и пробирку.
При посеве петлей последнюю стерилизуют путем прокаливания докрасна пламенем горелки (чтобы проволока была накалена докрасна по всей длине, петлю держат вертикально). Затем ее вводят во флакон или колбу с исходной пробой, остужают прикосновением к стенкам сосуда и погружают в питательную среду. В конце петли образуется тонкая прозрачная пленка - "зеркало". Полученную пробу втирают бактериальной петлей (петли кладут плашмя) в питательную среду. Посев ведут от края чашки к центру. С окончанием втирания, петлю и ее держатель прокаливают пламенем. Сосуды или флаконы закрывают, профламбировав (простерилизовав) их края и ту часть пробки, которая входит в горлышко сосуда.
Посев шпателем или тампоном на плотную питательную среду начинают после застывания агара в чашках. На поверхность среды петлей или стерильной пипеткой наносят точно измеренный объем жидкости (пробы). Затем пипетку тотчас погружают в дезинфицирующий раствор, а петлю обрабатывают на пламени горелки. Затем берут стерильный шпатель или тампон, слегка приоткрывают крышку, смачивают поверхность шпателя жидкостью, растирают ее, двигая шпатель или тампон взад и вперед сначала на ограниченном участке, а затем круговыми движениями по всей длине поверхности чашки. После этого шпатель или тампон вынимают из чашки и опускают в дезинфицирующий раствор. На чашке пишут номер пробы, дату и ставят в термостат вверх дном на 18-24 часовое выращивание.
Посев на жидкие питательные среды
При посеве проб воды, стоков на жидкие питательные среды используют петлю или пипетку (градуированную или Пастеровскую). У стерильной пипетки капилляр отламывают прокаленным пинцетом. Путем всасывания набирают ею определенный объем жидкости. После этого открытую часть пипетки, заполненную ватной пробкой, закрывают указательным пальцем правой руки и вынимают из сосуда. Пробку и горловину сосуда профламбируют на пламени, сосуд закрывают, а пипетку погружают в свежую питательную среду, где проводят бактериологические исследования. Открывание и закрывание сосуда или пробирки и занесение пипетки в сосуд с исследуемой жидкостью проводят над пламенем, соблюдая абсолютную стерильность. После посева пипетку немедленно помещают в дезинфицирующий раствор, а питательную среду с засеянной культурой микроорганизмов ставят в термостат для выращивания. Пассирование бактерий в термостате проводят в течение 18-24 часов при температуре, оптимальной для жизнедеятельности исследуемых микробов.