Приготовление плотных и жидких питательных сред для микроорганизмов

1. Мясо-пептонный агар (МПА). Он представляет собой твердую питательную среду, приготовленную из мясо-пептонного бульона (МПБ) с добавлением агар-агара. Для этого к 1 л МПБ добавляют 15-20 г агара и смесь нагревают в автоклаве или текучепаровом аппарате до растворения агара. Горячую среду нейтрализуют 20% раствором соды до слабощелочной реакции. Для осаждения хлопьев свернувшегося белка и других примесей в среду, нагретую до 100 °С, добавляют белок куриного яйца. После этого агаровую среду фильтруют через бумажный фильтр. Профильтрованный прозрачный мясо-пептонный агар разливают в 0,5-литровые колбы по 250 мл, затем их закрывают ватной пробкой и бумажным колпачком, после чего помешают в автоклав и стерилизуют при 1 атм. в течение 20 минут.

2. Мясо-пептонная желатина (МПЖ). Это твердая питательная среда, которую применяют для определения вида бактерий, так как разжижение или неразжижение желатины микроорганизмами является одним из важных диагностических признаков при идентификации. Готовят МПЖ следующим образом: к 1 л мясо- пептонного бульона добавляют 100-150 г желатины. Последнюю растворяют нагреванием среды до 100°, нейтрализуют добавлением 10%-го раствора NaOH до слабощелочной реакции. Затем в охлажденную до 40-50° желатину вливают взбитый белок куриного яйца с равным количеством воды и снова нагревают. После выпадения белков среда становится прозрачной. Ее фильтруют в колбу, разливают по пробиркам, закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве в течение трех дней подряд текучим паром.

3. Среда Эндо - твердая дифференциально-диагностическая среда, применяемая для определения кишечной палочки и бактерий тифо-паратифозной группы. В настоящее время ее выпускают в виде сухого порошка. Приготовление среды Эндо заключается в следующем: 4 г сухого порошка высыпают в 100 мл холодной дистиллированной воды. При тщательном перемешивании смесь нагревают до полного расплавления агара, кипятят 2-3 минуты. Горячую среду фильтруют через вату, после чего снова доводят до кипения. Затем остужают до 50° и разливают в боксе в стерильные чашки Петри, которые прикрывают крышками, оставляя открытой небольшую часть для испарения избыточной влаги. С подсушиванием среды крышки чашек закрывают.

4. Среда Мюнца (элективная среда) и др.

Разлив питательных сред

Плотные питательные среды перед разливом в бактериологическую посуду нагревают в автоклаве, водяной бане или текучепаровом аппарате до полного растворения. Разливают как с отмериванием определенных объемов сред, так и без отмеривания. В первом случае используют установку (рис. 2), состоящую из стеклянной воронки и градуированной бюретки, соединенной резиновой трубкой с двумя коленами стеклянного тройника, на третьем его колене имеется наконечник. Все резиновые переходы перекрывают зажимом Мора. До употребления открытые части установки заворачивают бумажными колпачками, укладывают в бикс и стерилизуют в автоклаве при 1 атм. Разливают среду в стерильном боксе.

Для этого установку монтируют в штатив, градуированный цилиндр наполняют средой, открыв зажим третьего колена тройника, выпускают точно отмеренное количество жидкой питательной среды (Рис. 2), включая агарпзованную с температурой среды 35-37°С в сосуды или чашки Петри, где культивируются микроорганизмы.

Рис. 2. Устройство для разлива питательной среды.

Разлив без отмеривания сред производят путем переливания над пламенем жидких сред из колб или флаконов в бактериологическую посуду (пробирки, матрицы, чашки). Техника разлива питательной среды в чашки, например, состоит в следующем (рис. 3).

Рис.3 Разливка МПА в чашки.

Флакон со средой берут в правую руку, над огнем горелки вынимают из него пробку. Флакон наклоняют так, чтобы исключить попадание микробов из воздуха. Тотчас же приподнимают крышку чашки и вливают в нее 10-15 мл питательной среды. Затем легкими круговыми движениями среду равномерно распределяют по всей площади чашки. После застывания агара чашку переворачивают вверх дном (при глубинном посеве проб) и переносят в термостат для выращивания микроорганизмов. Температуру выращивания принимают от 28 до 37°С.