Содержание лабораторной работы

1. Изучение теоретических сведений и рекомендованной литературы

Ознакомьтесь с теоретическими данными, представленными в данной лабораторной работе, а также с рекомендованной литературой.

2. Подготовка к проведению исследований

Ознакомьтесь с инструкциями по охране труда и технике безопасности при работе с сушильным шкафом, автоклавом и бактерицидными лампами и микроорганизмами.

3. Порядок выполнения работы

3.1 Приготовление мясо-пептонного агара

Твердую питательную среду, приготовьте из мясо-пептонного бульона (МПБ) с добавлением агар-агара. Для этого к 1 л МПБ добавляют 15-20 г агара и смесь нагревают в автоклаве или текучепаровом аппарате до растворения агара. После этого агаровую среду фильтруют через бумажный фильтр. Профильтрованный прозрачный мясо-пептонный агар разливают в 0,5-литровые колбы по 250 мл, затем их закрывают ватной пробкой и бумажным колпачком, после чего помешают в автоклав и стерилизуют при 1 атм. в течение 20 минут.

3.2 Приготовление косяков для пересева

В качестве питательной среды используют готовый мясо-пептонный агар (МПА). За 2-3 суток до посева дрожжевой суспензии МПА нагревают на водяной бане до полного растворения. Расплавленную агаризованную среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр. Для получения скошенного агара пробирки заполняют на 1/3 высоты, после чего закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при 0,05 МПа в течение 30 минут.

После стерилизации пробирки с разлитым МПА устанавливают в наклонном положении и оставляют в боксе, пока не застынет питательная среда. После чего пробирки помещают в термошкаф (термостат) при температуре от 30 до 32 ^оС в течение 2-3 суток.

Пересев выполняют в стерильном боксе с соблюдением следующих правил, предохраняющих культуру от загрязнения посторонними микроорганизмами:

• перед началом работы бокс моют 3% раствором хлорной извести;

• обеззараживают в течение 30 минут бактерицидными лампами;

• протирают спиртом рабочий стол, пробирку с культурой, руки;

• зажигают спиртовку;

• пробирку с исходной культурой держат так, чтобы поверхность с культурой была обращена вверх и хорошо видна;

• бактериологическую петлю держат вертикально в пламени горелки и прокаливают докрасна проволоку, затем обжигают примыкающую к ней часть держателя;

• вынимают ватные пробки из пробирки. Края открытой пробирки обжигают в пламени горелки;

• осторожно вводят стерильную петлю в пробирку с культурой. Чтобы не повредить клетки петлю вначале охлаждают, прикоснувшись к внутренней поверхности пробирки или к питательной среде, свободной от микроорганизмов. Легким скользящим движением отбирают небольшое количество микробной массы. Вынимая петлю из пробирки, следят за тем, чтобы переносимый материал не касался стенок;

• снова обжигают в пламени горелки край пробирки и закрывают обожженной ватной пробкой;

• пробирку ставят в штатив. Извлеченные клетки используют для пересева на сусло-агар. Слегка касаясь петлей поверхности питательной среды, не разрыхляя ее, зигзагообразным штрихом от одного края пробирки к другому осуществляют пересев клеток культуры спиртовых дрожжей;

• края пробирки обжигают и закрывают обожженной ватной пробкой;

• оставшиеся на петле клетки, сжигают в пламени горелки;

• на пробирке делают надпись: название культуры и дата засева.

Все операции около пламени горелки проводят по возможности быстро, чтобы не загрязнять культуру посторонней микрофлорой.

Выращивание дрожжей в пробирках проводят в течение 2-х суток в термостате при температуре от 28 до 30⁰с.