Техника посева и культивирования микроорганизмов

Изучение качественного и количественного состава микроорганизмов в объектах внешней среды основано на методе посева исследуемого материала (почвы, воды водоемов и рек, стоков производства и т.д.) на плотные и жидкие искусственные среды. Техника посева зависит от консистенции питательной среды и цели бактериологического исследования.

Для проведения микробиологических посевов необходимы: исследуемый материал, правильно подготовленная стерильная бактериологическая посуда (пробирки, пипетки, градуированные на 1.2 и 10 мл или пастеровские на 1 мл, чашки Петри), бактериальная петля, игла, стеклянный или металлический шпатель (рис. 4), штатив для пробирок, спиртовая или газовая горелка, банка с дезинфицирующим раствором для обработки инфицированного (зараженного) материала или пробы, физиологический раствор, питательная среда.
	а б в
	Рис. 4. Игла (а) Петля (б) Шпатель (в)

При посеве необходимо сохранять чистоту исследовательской лаборатории, соблюдать все приемы техники посева и стерильность всей бактериологической посуды и инструментов.

Посев проб на плотные и жидкие питательные среды

Первичный посев проб воды, как правило, производят на плотную питательную среду в чашки. Он нужен для того, чтобы выяснить внешний вид колоний бактерий, образование ими пигментов и условия развития микробов. Полученные изолированные колонии служат в дальнейшем для пересева и получения чистой культуры микроорганизмов.

Глубинный посев исследуемого материала

Этот метод посева проб (воды, почвенного раствора, различных сточных вод) применяют в основном для количественного учета микроорганизмов в объектах внешней среды. В основу данного метода посева положен метод титра, т.е. разведение исследуемой пробы в физиологическом растворе (0,44 г NaClна 100 мл водопроводной или дистиллированной воды) до определения искомого числа микробов. Для этого берут 3-5 стерильных пробирок, наливают в каждую из них по 9 мл разбавляющего и водопроводного (стерильного) физиологического растворов. Разливают стерильной пипеткой на 10 мл над пламенем горелки. На каждую исходную пробу берут 3-5 пробирок с физраствором, соответствующим разбавлениям 1:10, 1:100, 1:1000, 1:10000, 1:100000. Прежде чем приступить к разбавлению исходной пробы, определяют из каких разведений производить посев. Согласно разведению берут стерильные чашки Петри, где на крышке восковым карандашом записывают номер пробы, разведение (1:10, 1:100 и т д.) и день посева.

Разводят исследуемую пробу путем отбора из сосуда 1 мл исследуемой пробы и переносят ее в первую пробирку с физраствором, разбавленным в соотношении 1:10. Затем забирают из этой пробирки 1 мл разбавленного раствора и переносят во вторую с разбавляющей водой и разводят 1:100, далее переносят в третью с разбавлением 1:1000 и т.д. Одновременно из каждой пробирки разведенной пробы берут по 1 мл жидкости и производят посев в соответствующие чашки Петри (1:10, 1:100, 1:100 и т.д.). Завершив посевы проб, приступают к разливу в каждую чашку по 10-15 мл МПА, расплавленного и остуженного до 37-40 °С (при данной температуре колба со средой, приложенная к щеке, не должна вызывать ощущения жжения).