Методы диагностики фитопатогенных вирусов

К основным методам диагностики фитопатогенных вирусов относятся следующие: 1) визуальный; 2) уста­новление инфекционности заболевания (передача соком, механическим способом, переносчиками—^ насекомыми, клещами, грибами, нематодами; прививками, повили­кой); 3) метод растений-индикаторов; 4) серологиче­ский метод; 5) электронная микроскопия; 6) метод включений; 7) анатомо-цитологический метод; 8) люми­несцентный анализ; 9) химический метод.

Методы диагностики можно подразделить на пря­мые (электронная микроскопия, метод включений) и кос­венные (растений-индикаторов, серологический, люми­несцентный анализ и др.). Наиболее результативными методами в вирусологии являются электронно-микроскопический, растений-индикаторов, серологический, включений, установление инфекционности посредством переносчиков (для вирусов, механически не передаю­щихся). Нередко для диагностики используют комплекс методов.

Визуальный метод диагностики. Диагностика вирус­ных болезней по внешним симптомам — прием вспомо­гательный, позволяющий обычно сделать лишь предва­рительную ориентировку в отношении природы болез­ни. По разнообразию симптомы вирусных болезней можно сгруппировать в 4 типа: 1) задержка роста, 2) изменение окраски различных органов, 3) изменение формы и размеров листьев, плодов, цветков, 4) пораже­ния некротического типа.

Установление инфекциояности заболевания. Досто­верным и убедительным подтверждением вирусной этио­логии является инфекционность, если при этом исключе­на возможность действия других вредных организмов (грибов, бактерий, нематод, тлей, клещей и т. д.). До- казательством инфекционности служит воспроизведе­ние на том же виде растений патологических измене­ний, аналогичных с изучаемым образцом. Достигается это несколькими способами: 1) механически—путем на­тирания соком, укола иглой, введения сока в проводя­щую систему шприцем, 2) при помощи переносчиков, 1 в качестве которых могут быть насекомые (тли, цикадки, трипсы, жуки), клещи 3) прививками, 4) че­рез повилику (Cuscuta sp.).

Серологический метод, основанный на иммуногенных и антигенных свойствах фитовирусов, позволяет установить вид вируса, генетические взаимоотношения между вирусами, определить концентрацию и локализацию вируса в клетках и тканях растений.

Метод растений-индикаторов. Индикаторным назы­вают растение, которое дает четкую реакцию на дан­ный вирус, сравнительно легко отличимую от реакции этого же вида растения- на другие вирусы. Например, Nicotiana glutinosa L. является растением-индикатором на ВТМ. В ответ на заражение этим вирусом через 2—3 дня на инокулированных листьях развиваются не­кротические пятна. Название «индикатор на ВТМ» не означает, что N. glutinosa не поражается другими виру­сами, однако ее реакция на ВТМ является специфиче­ской. .."

Нередко для точного определения какого-либо виру­са этим методом используется 2...3 вида растений-индикаторов. Бывают и такие случаи, когда один и тот же индикатор пригоден для диагностики нескольких ви­русов.

По типу реакций растения-индикаторы подразделя­ются на три группы: 1) растения с местной (локальной) реакцией на заражение вирусом, проявляющейся толь­ко на том листе (или листьях), который был инокули-рован инфекционным соком, 2) растения-индикаторы с системной реакцией, развивающейся в виде мозаики, деформации, различных узоров, некротических пораже­ний и пр. на различных органах растения, и 3) рас­тения-индикаторы со смешанной реакцией на вирус— сначала реакция проявляется на инокулированном ли­сте, а через несколько дней инфекция развивается си­стемно, по всему растению.

При диагностике методом индикаторных растений иногда используется способность вирусов системно за­ражать (или, наоборот, не вызывать реакции) различ­ные виды того же семейства, к которому относится ис­пытуемое растение. Набор таких индикаторов, носящих название растений-дифференциаторов, используется, например, при диагностике вирусов злаков, механи­чески передаваемых только на растения семейства зла­ковых (вирусы полосатой мозаики пшеницы, мозаики пырея, мозаики райграса и др.).

Метод растений-индикаторов пригоден также для диагностики смешанных вирусных инфекций и выделе­ния отдельных вирусов из смеси, для определения кон­центрации вирусов методом биологического титрования (в этом случае используются тест-растения с локаль­ной реакцией на вирус).