Приготування м’ясопептонного бульйону (мпб) і м’ясопептонного агару (мпа) із м’яса та із сухого промислового мпа Хід роботи
Основою для його виготовлення служить м’ясна вода, яку готують таким чином: пропущене через м’ясорубку волове м’ясо, попередньо звільнене від жиру, кісток і сухожиль заливають подвійним об’ємом водопровідної води та витримують 24 год при температурі, близькій до кипіння, або при кімнатній температурі протягом 13-15 год. Настій кип’ятять 1 год з м’ясом або без нього, і фільтрують через кілька шарів марлі. До 1 л отриманої м’ясної води додають 10 г пептону і 15 г хлориду натрію, доводять рН до значення 7,0. Для отримання м’ясопептонного агару (МПА) до МПБ додають 1,5-2,0 % агару. МПБ і МПА стерилізують при 1 атм. протягом 20 хв.
Перед використанням МПА його розплавляють у пробірках і залежно від потреби скошують (рис. 1).
Рис. 1. Виготовлення скошеного м’ясо-пептонного агару.
Техніка приготування середовищ, із готових сухих, які випускає промисловість Хід роботи
Готування середовища м’ясопептонного агару
У колбу місткістю 1000 см3 вносять порошку м’ясопептонного агару згідно інструкції до нього зваженого з точністю 0,1г, і додають здистильовану воду 1000 см3 відміряну циліндром. Перемішують, кип’ятять на слабкому вогні до повного розчинення агару, фільтрують через марлю, і встановлюють рН до (7,2±0,2) одиниць розчином натрію гідроксиду або соляної кислоти, розливають у стерильні пробірки або колби. Стерилізують в актоклаві за температури (121±1)ºС протягом 20 хв.
Готування середовища Ендо для виділення кишкової палички
У колбу місткістю 250 см3 вносять 5г порошку середовища Ендо, зваженого з точністю до 0,1г, і додають здистильовану воду 100см3, відміряну циліндром. Нагрівають при помішуванні до повного розчинення середовища, кип’ятять на слабкому вогні 5 хв., не допускаючи пригорання. Фільтрують через марлю в колбу, знову кип’ятять 5хв., охолоджують приблизно до температури (45±5)ºС і розливають у чашки Петрі.
Готування середовища м’ясопептонного агару з кров’ю великої рогатої худоби або вівці для визначення гемолітичних властивостей
Розплавляють 100 см3 м’ясопептонного агару, охолоджують приблизно до температури (45±5)ºС і стерильною піпеткою додають 5см3 цитратної крові великої рогатої худоби або вівці, рівномірно перемішують і розливають у стерильні чашки Петрі.
Готування середовища Гісса для визначення цукролітичних властивостей мікроорганізмів
Готують з сухого середовища Гісса згідно інструкції до нього, у разі відсутності середовища, готують із складників.
У колбу місткістю 250см3 вносять 0,5г пептону і 0,5г одного із вуглеводів (глюкози, сорбіту, маніту чи лактози), зважених з точністю до 0,1г і додають 100см3 здистильованої води відміряної циліндром. Перемішують і кип’ятять на слабкому вогні 5 хв., охолоджують до температури приблизно (45±5)ºС і додають індикатор Андреде. Встановлюють рН до (7,2±0,2) одиниць розчином натрію гідроксиду або соляної кислоти. Середовище розливають по 5см3 у стерильні пробірки з поплавцями і стерилізують в автоклаві за температури (121±1)ºС протягом 20 хв.
Середовище Сабуро для виділення грибів і дріждів
Пептону - 10,0г, глюкози - 40,0г, агару мікробіологічного - 15,0г, води дистильованої - 1000см3. Стерилізують у автоклаві при температурі +1210С протягом 15хв. Безпосередньо перед використанням середовища, після розплавлення додають 50 МО бензилпеніціиліну натрію і 40мг стрептоміцину на 1000см3 або перед стерилізацією додають хлорамфенікол із розрахунку 50 мг на 1000см3 середовища.