Свойства антител.

Нормальные антитела – естественные антитела которые присутствуют в любой сыворотке человека, животного и дают базальный уровень иммуноглобулинов: антиэритроцитарные антитела, противобактериальные. Эти антитела постоянны в организме, дополнительной антигенной стимуляции не требуется все перечисленные микроорганизмы постоянно контактируются с человеком.

Моноклональные антитела – это антитела к одной антигенной детерминанте они принадлежат к одному классу, подклассу аллотипу имеют один вид легких цепей, имеют одинаковую аффиность поскольку моноклональные антитела образуются одним клоном В-лимфоцитов и поэтому эти антитела гомогенные, когда иммунизируют человека вакцинным препаратов или после болезни в сыворотке человека появляется антитела к разным антигенным детерминантам. И поэтому иммунные сыворотки от переболевших или иммунизированных гетерогенны. Гетерогенность антител снижает чувствительность методов индикации антигенов с помощью сывороток.

Получают моноклональные тела методом in vivo гибридом разработанным в 1975 году Келлером и Мильштейном (Нобелевская премия). Суть получение антител этим методом состоит в следующем:

1. этап: Получение гибридому и отбор клеток. Мышь иммунизируют антигеном, после иммунизации берут селезенку и получают из нее лимфоциты, которые должны превращаться в плазматическую клетку продуцирующие антитела. Другую мышь (Balb C) с плазмоцитомой (опухолевый процесс поражающий селезенку) в органах этой мыши есть опухолевая плазматическая клетка, которую совмещают с нормальными клетками от здоровой мыши в присутствии полиэтиленгликоля, которые помогают гибридизации. Получившиеся клетки отбирают на селективной среде – ГАТ (гипоксантин – аминоптерин – тинидин) в этой среде погибнут нормальные клетки, опухолевые клетки, а гибридомные выживут и будут расти.

2. этап: Отбор клеток нужных продуцентов. Проводится методом тестирования на искомые антитела. Делают с помощью иммунологических реакций ИФА, РИФ, пластинки с имобилизированным антигеном

3. этап: Клонирование гибридомных клеток много раз на специальной питательной среде.

4. этап: Консервирование – сипользуют низкие температуры

5. этап: Получение моноклональных антител. Гибридломные клетки вводят внутрибрюшинно белым мышам (здоровым) они там размножаются у них возникает асцит в котором содержится много моноклональных антител.

Второй метод: размножение гибридомных антител на культуре и они там продуцируют антитела (in vitro).

Моноклональные антитела получены к антигенным детерминантам Т (СД4) и В-лимфоцитов. МКА используются для идентификации Т и В – лимфоцитов и их субпопуляции, которые определяют активность, продукцию лимфокина. МКА получены для идентификации цитокинов в сыворотке, ВИЧ-вируса, для диагностики определяют антигенные детерминанты вещества. МКА используют в онкологии для терапии опухолевых заболеваний. МКА для таксономических идентификаций.

В последнии годы гибридому культивируют с помощью аппарата цитостат куда подается питательная среда и гибридомность поддерживается автоматически → большое количество генетически гомогенных антител.

Полные и неполные антитела: Деление основано на способности полных антител образовывать в результате иммунологической реакции с антигеном комплекс видимый невооруженным глазом (агглютинация) при преципитации этот комплекс называется преципитат (т.е. аморфный осадок). У полного антитела имеетя две и более валентности (активных центров) и взаимодействия с антителом образует решетку. (IgM, IgG, IgA) Неполное антитело моновалентное и взаимодействуя с антителом связывает одну детерминанту и этот комплекс мы не видим поэтому они еще называются блокирующими антителами. Поэтому для выявления неполных антител требуется специальный метод Кумбса при котором используются вторичные антитела, и оно садится на первичное антитело и тогда этот антиген свяжется в макроагрегат.

Комплимент связывающие несвязывающие антитела. Связывающие взаимодействуют с комплментом с помощью FС-фрагменту и дальше идет реакция связывания комплемента. Несвязывающие не взамодействуют с комплементом.

Антитела абзимы – абзимология (антитела ферменты), катализаторы биохимических процессов. У мноих Ig есть ферментативная активность (протеазная, нуклеазная). Есть антитела ферменты и на другие разновидности веществ. Считают что эти свойства антител очень древние.

Бифункциональные антитела: обладают две специфичности фаг-фрагментов т.е могут присоединять два антигена разной специфичности.

Имунотоксины: гибрид молекулы Ig с токсином. Эти антитела получают методом биотехнологии. Присоединяя к Ig молекулу токсина такое антитело способно направленно доставить токсин к клетке мишени (опухолевой) и нарушить метаболизм этой клетки. Используют в лечении опухолей, аллергий.