2

Смоленская государственная академия физической культуры, спорта и туризма

Кафедра биологических дисциплин

Реферат

На тему:

«Методы исследования системы крови»

Выполнил: студент II курса, группы 3-22.

Проверила: Хлевная Н.В.

Смоленск 2007

ПЛАН:

1. Подсчет эритроцитов.

2. Определение количества гемоглобина в крови

3. Подсчет лейкоцитов

3

5

6

1. Подсчет эритроцитов.

Для проведения работы необходимы микроскоп, смеситель для эритроцитов, счетная камера, игла Франка, 3%-ный раствор поваренной соли, спирт, спиртовой раствор йода, эфир, вата и чашечка для разбавляющей жидкости.

Счетная камера представляет собой утолщенную стеклянную пластинку, в середине торой имеются желобки, образующие между собой узкие выпуклые пластинки. Средняя пластинка ниже уровня боковых на 0,1 мм и поэтому при накладывании покровного стекла имеет просвет высотой 0,1 мм. Она разделена пополам желобком, по обе стороны от которого нанесена сетка. Эта сетка состоит из больших квадратов (сетка Горячева — из 25 больших квадратов), каждый из них разделен линиями на 16 квадратов, сторона которых равна 1/20 мм, а площадь 1/400 мм². Если при накладывании покровного стекла промежуток над квадратами равен 1/10 мм, то так называемый объем малого квадрата равен 1/4000 мм³.

Игла Франка применяется для прокола кожи концевой фаланги пальца. Выдвигая иглу на то или иное расстояние за муфты, в которую она заключена, можно дозировать глубину прокола. Принцип действия иглы Франка заключается в том, что ее острый наконечник подтягивается, сжимая пружину, до момента фиксации ее боковым рычажком в положении взвода. При нажимании на рычажок пружина выталкивает иглу, которая производит небольшой разрез кожи со строгой дозировкой.

Смеситель для эритроцитов представляет собой капилляр с ампульным расширением, внутри которого имеется стеклянная короткая палочка красного цвета для размешивания крови. На конец капилляра, выступающий за ампульным расширением, надета резиновая трубка для насасывания крови и разбавителя. На длинную часть капилляра нанесены метки 0,5 и 1,0, а расширенной частью — метка 101. Таким образом, объем ампульной части капилляра в 100 раз больше объема капилляра до метки 1,0, объем капилляра выше метки 0,5 в 200 раз больше объема до метки 0,5.

Прежде чем приступить к выполнению практической работы, надо ознакомиться с иглой Франка. Поворотом гайки дозируют глубину прокола от 2 до 3 мм, в зависимости от толщины кожи пальца испытуемого. Несколько раз втягивают в муфту иглу, закрепляя ее при помощи затвора в положении взвода, и проводят «холостые» (тренировочные) проколы.

Следует ознакомиться также со счетной камерой. Поставив ее под микроскоп, рассмотреть малые и большие квадраты и научиться перемещать камеру на предметном столике микроскопа. Затем нужно проверить, хорошо ли промыт и просушен смеситель для эритроцитов. Если состояние его удовлетворительное, то при поворачивании капилляра стеклянная палочка для перемешивания крови свободно перемещается внутри ампулообразного расширения.

Испытуемого усаживают так, чтобы он мог удобно положить левую руку на стол. Прокол обычно делают на мякоти концевой фаланги 4-го пальца левой руки, которую предварительно тщательно моют с мылом и осушают. Палец протирают спиртом, а затем эфиром. Кисть плотно фиксируют на столе таким образом, чтобы палец лежал на твердой основе. Брать кровь, держа палец на весу, не рекомендуется. Сняв муфту, протирают иглу спиртом и эфиром. Затем надевают муфту так, чтобы кончик иглы выступал на 2—3 мм за ее пределы, и оттягивают иглу за рукоятку до упора. Держа в правой руке иглу Франка перпендикулярно к пальцу и плотно прижимая его левой рукой к столу, мягко нажимают на рычажок и наносят небольшую ранку коже пальца. Первую каплю крови снимают сухой ватой, из второй капли берут кровь. Для этого кончик капилляра смесителя полностью погружают в каплю под острым углом и ртом осторожно насасывают кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Затем переносят капилляр в чашечку с раствором поваренной соли, предварительно сняв кровь снаружи фильтровальной бумагой, ставят его в косое положение и набирают разбавитель до метки 101. Вся эта процедура должна проводиться достаточно быстро, чтобы кровь в капилляре не успела свернуться. Набрав разбавитель, переводят смеситель в горизонтальное положение и, держа его между пальцами, слегка поворачивают, добиваясь равномерного разбавления крови. Затем, встряхнув смеситель и выпустив 3—4 капли наружу, вводят небольшую каплю в желобки счетной камеры и сверху осторожно протирают покровное стекло до появления ньютоновых колец, следя, чтобы под ними не образовались пузырьки воздуха. Теперь можно устанавливать камеру на предметный столик микроскопа и рассматривать последовательно с малым и большим увеличением сетку и квадраты, на фоне которых видны эритроциты.

Перед началом подсчета эритроцитов чертят на листе бумаги 5 больших квадратов и в каждом по 16 малых для проставления в них соответствующих цифр. Принято считать эритроциты в 80 малых квадратах (в 5 больших) в разных местах сетки, так как это позволяет получать достаточно достоверные результаты. При подсчете следует учитывать эритроциты, расположенные внутри квадрата, и только на двух из четырех пограничных линий, с тем, чтобы не было повторного подсчета одних и тех же клеток.

Узнав общую сумму эритроцитов в 80 малых квадратах и зная объем каждого квадрата (1/4000 мм³), а также степень разведения крови (в 200 раз), определяют число эритроцитов в 1 мм³ крови по следующей формуле:

х =(А×4000×200)/80,

где х — общее число эритроцитов в 1 мм³ крови, А — число эритроцитов в 80 малых квадратах.