Темнопольная микроскопия

Темнопольная микроскопия основана на способности микроорганизмов сильно рассеивать свет. Для темнопольной микроскопии пользуются обычными объективами и специальными темнопольными конденсорами. Существует несколько типов таких конденсоров, различающихся по устройству.

Основная особенность темнопольных конденсоров за­ключается в том, что центральная часть у них затемнена, и прямые лучи от осветителя в объектив микроскопа не попадают. Объект освещается косыми боковыми лучами, и в объектив микроскопа попадают только лучи, рассеянные частицами, находящимися в препарате. Темнопольная микроскопия основана на эффекте Тиндаля, известным примером которого служит обнаружение пылинок в возду­хе при освещении их узким лучом солнечного света.

Чтобы в объектив не попадали прямые лучи от осветителя, апертура его должна быть меньше, чем апертура конденсора. Для уменьшения апертуры в обыч­ный объектив помещают диафрагму или пользуются специальными объективами, снабженными ирисовой диаф­рагмой.

Рис.4 Схема темнопольного микроскопа

При темнопольной микроскопии микроорганизмы выглядят ярко светящимися на черном фоне. При этом способе микроскопии могут быть обнаружены мельчайшие микроорганизмы, размеры которых лежат за пределами разрешающей способности микроскопа. Однако темнопольная микроскопия позволяет увидеть только контуры объекта, но не дает возможности изучить внутреннюю структуру.

Обычно с помощью темнопольной микроскопии изуча­ют препараты типа «раздавленная капля». При этом очень строгие требования предъявляются к качеству предмет­ных и покровных стекол и приготовлению препарата. Предметные стекла должны быть не толще 1,1 —1,2 мм, покровные — 0,17 мм, без царапин и загрязнений. При приготовлении препарата следует обращать особое внима­ние на отсутствие пузырьков и крупных частиц (все эти дефекты будут видны ярко святящимися и не позволят наблюдать препарат).

Для темнопольной микроскопии необходимы яркие источники света, поэтому следует применять более мощ­ные осветители и максимальный накал лампы.

Настройка темнопольного освещения в основном за­ключается в следующем:

1) устанавливают свет по Кёлеру;

2) заменяют светлопольные конденсор темнопольным;

3) на верхнюю линзу конденсора наносят иммерсионное масло или в крайнем случае дистиллированную воду;

4) поднимают конденсор до соприкосновения с нижней поверхностью предметного стекла;

5) объектив малого увеличения фокусируют на препарат;

6) с помощью центрировочных винтов переводят в центр поля зрения светлое пятно (иногда имеющее затемненный центральный участок);

7) поднимая и опуская конденсор, добиваются исчезновения затемненно­го центрального участка и получения равномерно освещен­ного светлого пятна. Если этого сделать не удается, то надо проверить толщину предметного стекла (обычно такое явление наблюдается при использовании слишком толстых предметных стекол—конус света фокусируется в толще стекла).

После правильной настройки света устанавливают объ­ектив нужного увеличения и исследуют препарат.