Опсонофагоцитарная реакция

Опсонофагоцитарная реакция (ОФР) является одним из методов оценки активности иммунного фагоцитоза. Чем эта активность выше, тем выше устойчивость организма к инфекции. В иммунном организме под влиянием антител (опсонинов) фагоцитоз протекает активнее (поглощается большее количество микробов в более короткий срок). Поэтому показатели фагоцитарной активности имеют не только диагностическое значение (например, при бруцел­лезе), но и позволяют прогнозировать исход инфекционно­го процесса, оценивать результаты лечения и вакцинации. Для реакции необходимы:

1. Антиген — взвесь живых или убитых микроорганизмов.

2. Антитело (опсонины) — исследуемая сыворотка.

3. 3. Фагоциты — обычно нейтрофилы исследуемой крови.

Постановка реакции. С помощью микропипетки в небольшие пробирки наливают 0,05 мл 2% раствора натрия цитрата; 0,1 мл исследуемой крови и 0,05 мл взвеси микроорганизмов, густота которой соответствует в 1 мл 10 ед. мутности по оптическому стандарту ГИСК.

Внимание! Для каждого ингредиента должна быть использована отдельная пипетка.

Содержимое пробирок перемешивают. Пробирки ста­вят в термостат на 30 мин, после чего вновь перемешива­ют их содержимое и готовят тонкие мазки (как мазки крови). Окрашивают по Романовскому — Гимзе.

Учет результатов. В разных местах мазка подсчи­тывают 25 нейтрофилов, учитывая в каждом из них количество захваченных микроорганизмов. Показатель опсонофагоцитарной реакции (ПОФР) вычисляют по формуле:

ПОФР=За+2б+1с+0, где а — число нейтрофилов, содержащих свыше 41 бакте­рии; б—число нейтрофилов, содержащих от 21 до 40 бактерий; с—число нейтрофилов, содержащих от 1 до 20 бактерий; 0 — число нейтрофилов, не содержащих бак­терии.

Максимальный показатель опсонофагоцитарной реак­ции при такой системе учета составляет 75.

Результат реакции оценивают по следующей схеме:

при ПОФР от 1 до 24 — слабоположительный; при ПОФР от 25 до 49 — ясновыраженный; при ПОФР от 50 до 15 — резкоположительный.

У здоровых людей ПОФР составляет 0—1, редко 4—5, Ясновыраженный и резкоположительный результа­ты реакции говорят о высоком опсонизирующем действии сыворотки обследуемого лица с выраженной активностью фагоцитов крови.

Определение только активности антител —опсонинов проводится опытом установления опсонического индекса—отношения фаго­цитарного показателя в присутствии иммунной (исследуемой) сыворотки к фагоцитарному показателю в сыворотке, заведомо не содержащей антител к данному микробу. Опыт ставят так: берут 2 пробирки, в одну из которых (опытную) вносят в равных количествах (обычно по 0,2 мл): 1) сыворотку обследуемого лица; 2) взвесь микробов, к котором опреде­ляют наличие опсонинов; 3) лейкоциты (можно из брюшной полости мыши). В контрольную пробирку вносят: 1) сыворотку без опсонинов (контрольную); 2) те же микробы, что и в опытную; 3) лейкоциты (те же, что и в опытную пробирку).

Обе пробирки выдерживают в термостате в течение 30 мин, а затем из той и другой готовят мазки, фиксируют и окрашивают по Романовскому — Гимзе. Микроскопируют мазки и определяют фагоцитарный показатель в опытной и контрольной пробирках.

При наличии опсонинов в исследуемой сыворотке опсонический индекс будет больше единицы. Чем больше число, полученное от деления показателя фагоцитоза исследуемой на фагоцитарный показа­тель контрольной сыворотки, тем более выражено действие антител — опсонинов.