|
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ СРЕДНЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «КРАСНОЯРСКИЙ МЕДИКО-ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЙ КОЛЛЕДЖ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ |
Нестеренко.Н.В.
Учебное пособие по
общей
микробиологии.
Красноярск 2010
ББК Н-56
Нестеренко. Н.В. Методическое пособие по «Общей микробиологии»
Красноярск: Красноярский медико – фармацевтический колледж – 2010
Аннотация
Методическое пособие по «Общей микробиологии» предназначено для студентов средних специальных заведений по специальности 060604 Лабораторная диагностика и 060105 Медико – профилактическое дело, для базового и повышенного уровня обучения.
Пособие представляет теоретический материал по общему разделу микробиологии и состоит из нескольких глав.
В пособии освещены вопросы общей микробиологии. Описаны требования по технике безопасности, методы дезинфекции и стерилизации, манипуляции с экспериментальными животными. Дана информация об оснащении бактериологической лаборатории и методах микробиологии, технике выращивания и изучения микроорганизмов в живом и окрашенном состоянии, приготовлении питательных сред, изучении антибиотикоустойчивости, дифференциально – диагностическом тестировании. Включен материал по бактериофагам, генетике бактерий, идентификации микроорганизмов с помощью ПЦР, об иммунитете и методах его оценки.
Методическое пособие заканчивается перечнем контрольных вопросов, помогающих усвоению и закреплению пройденного материала
Рецензенты: Тюльпанова.О.Ю.
Питрукова.О.К.
Оглавление.
Глава 1. Микробиологическая лаборатория 5-10
Глава 2. Микроскоп и микроскопические методы исследования 10-19
Глава 3. Основы классификации и морфологии микроорганизмов 20-29
Глава 4. Физиология микроорганизмов 29-39
Глава 5. Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы 39-59
Глава 6. Распространение микроорганизмов в природе 59-62
Глава 7. Питательные среды и микробиологическое исследование 63-76
Глава 8. Фаги 76-81
Глава 9. Антибиотики. Химиопрофилактика и химиотерапия 82-89
Глава 10. Генетика микроорганизмов 89-95
Глава 11. Учение об инфекции 95-112
Глава 12. Учение об иммунитете. Реакция иммунитета. Иммунопрофилактика и иммунотерапия инфекционных болезней. 112-147
Глава 13. Аллергия 147-154
Введение
Современный этап развития медицины и биологии характеризуется стремлением познать физиологические и патологические функции организма, процессы обмена веществ, законы наследственности и изменчивости организмов, их эволюции с позиций молекулярной биологии. В решении этих важнейших проблем значительную роль сыграли исследования в области микробиологии. Наряду с проведением теоретических исследований микробиология решает проблемы большого практического значения, оказывая огромное влияние на развитие, успехи и достижения различных разделов медицины и практики здравоохранения.
Микробиология является наукой общебиологического и медицинского теоретического и практического значения, которая даёт возможность понять общие и частные закономерности, присущие здоровому и больному человеку.
При составлении пособия по микробиологии для студентов Красноярского медико-фармацевтического колледжа в соответствии с современным состоянием науки большое внимание было уделено разделам теоретического порядка, в частности физиологии, генетике микробов, учению об инфекции и иммунитете, общим и частным вопросам вирусологии.
Общая микробиология
Глава 1. Микробиологическая лаборатория
Микробиологические лаборатории как самостоятельные структурные единицы существуют при центрах госсанэпиднадзора, в инфекционных больницах, больницах общего типа, некоторых специализированных стационарах (например, в туберкулезных, ревматологических, кожно – венерологических, поликликлинических диагностических центрах.
Задача бактериологической лаборатории.
Бактериологические лаборатории при центрах госсанэпиднадзора осуществляют исследования на общую обсемененность, а также на зараженность условно – патогенной микрофлорой объектов внешней среды: воздуха, воды, почвы продуктов питания; проводят обследование организованных коллективов и отдельных лиц на носительство патогенных бактерий кишечной палочки, коринебактерий дифтерии, коклюша, паракоклюша, менингококка.
Бактериологические лаборатории лечебно – профилактических учреждений выполняют анализы. Для этого проводят выделение возбудителя и определение иммунного ответа организма на внедрение микроорганизмов (серологическая диагностика). Кроме того, проводят выявление носителей патогенных (болезнетворных) микроорганизмов. Для постановки этиологического диагноза инфекционной болезни, что позволяет своевременно и правильно выбрать специфическое лечение.
Бактериологические лаборатории при больницах исследуют:
выделения больных (моча, кал, мокрота), патологический материал (гной, кровь, слизистое отделяемое носоглотки, спинномозговая жидкость и трупный материал);
объекты внешней среды (вода, воздух, почвы, продукты питания, смывы с предметов обихода, рук и т.п.).
Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования.
Проведение работы в бактериологических лабораториях возможно только при наличии разрешения, выданного главным государственным санитарным врачом административной территории на срок до 5 лет.
Помещение бактериологической лаборатории.
Работа с возбудителями заразных болезней требует, чтобы помещения лаборатории размещались в отдельном здании либо были изолированы от больничных палат, пищевых блоков. Диагностические лаборатории должны иметь два входа: один – для сотрудников, другой – для доставки материала на исследование. Допускается получение материала через передаточное окно. Помещения лаборатории делят на «заразную» и «чистую» зоны и располагаются по ходу выполнения анализов.
«Чистая» зона лаборатории включает:
Комнату для верхней одежды.
Помещение для подготовительных работ (препараторская, моечная для приготовления и розлива питательных сред и др.)
Стерилизационная.
Комната с холодильником для хранения питательных сред и диагностических препаратов.
Комната для отдыха и приема пищи.
Комната для работы с документацией.
Подсобные помещения.
Туалет.
В «заразной» зоне размещают:
1.Комнату для приема и регистрации материала, поступающего на исследование.
2.Боксы.
3.Комнаты для проведения бактериологических исследований.
4.Комнаты для проведения серологических исследований.
5.Помещение для люминисцентной микроскопии.
6.Комната для проведение зооэнтомологиеских работат.
7.Термостатная комната и автоклавная.
Помещения, где проводится работа с живыми организмами, оборудуются бактерицидными лампами.
Задача медицинской микробиологической лаборатории — диагностика инфекционных болезней. Для этого проводят выделение возбудителя и определение иммунного ответа организма на внедрение микроорганизмов (серологическая диагностика). Кроме того, проводят выявление носителей патогенных (болезнетворных) микроорганизмов. Имеются лаборатории, в которых проводят вирусологические исследования. В специальных санитарно-бактериологических лабораториях проводят исследования с целью выявления степени микробного загрязнения внешней среды и различных объектов.
Лабораторная комната предназначена для проведения микробиологических исследований. Она должна быть просторной и светлой. Стены красят светлой масляной краской, пол покрывают линолеумом, лабораторные столы— пластиком или стеклом, что удобно для влажной уборки и дезинфекции. В лабораторной комнате оборудуют рабочие столы для врача и лаборанта, место для окраски препаратов, термостат, холодильник, центрифугу, микроскоп, шкафы, раковину с подводкой горячей и холодной воды, газовые горелки (при отсутствии газа работают со спиртовыми горелками).
Число лабораторных комнат определяется объемом работы лаборатории. В крупных лабораториях выделяют отдельные комнаты для работы с различными видами возбудителей.
Рабочий стол устанавливают у окна, чтобы свет падал сбоку или прямо. На столе размещают горелку, бактериологические петли, банки с дезинфицирующим раствором и ватой.
Перед началом работы на столе размещают все необходимое для проведения исследования. Горелку устанавливают на расстоянии, равном предплечью работающего, т. е. в позиции, исключающей лишние движения во время работы. Размер пламени в горелке и правильное свечение регулируют до начала работы.
В термостате при проведении обычных исследований температура должна быть 37°С. В больших лабораториях может быть оборудована специальная термальная комната. Температуру ежедневно регистрируют.
Рис. 1 Сухожаровой шкаф
В холодильнике держат некоторые питательные среды, диагностические препараты, кровь, желчь и пр.
Центрифугу используют для отделения плотных частиц от жидкости (например, эритроцитов от сыворотки).
В шкафах держат штативы, посуду, сухие питательные среды, реактивы и т. п.
Около раковины должны находиться сосуд с дезинфицирующим раствором для обработки рук и аптечка с набором предметов для оказания первой медицинской помощи.
Бокс — строго изолированное помещение для проведения микробиологической работы в условиях, требующих особой стерильности. Обеспложивание воздуха проводят с помощью бактерицидных ламп. Подача в бокс через приточно-вытяжную вентиляцию обеззараженного воздуха определенной температуры и влажности является лучшим способом обеспечения нужных условий для работы. Обычно в боксе работают два человека. Входят в бокс через предбоксник, в котором переодеваются (халат, тапочки, шапочка, маска) и переходят в бокс через вторую дверь.
В боксе не разговаривают и избегают лишних движений.
Помещение для приготовления питательных сред должно быть рядом с моечной и стерилизационной. В этой комнате должна быть раковина с подводкой горячей и холодной воды, дистиллятор, плита (газовая или электрическая), шкафы или стеллажи для хранения сухих питательных сред, химических реактивов, стерильной посуды.
Моечная – комната для мытья и обработки посуды, которая должна иметь раковину (с холодной и горячей водой) и плиту. Моечную оборудуют столами, стеллажами, снабжают приспособлениями для мытья посуды: моющими средствами, ершами, тряпками.
В стерилизационной находятся приборы для стерилизации чистой посуды, питательных сред и обеззараживания отработанного материала: автоклавы, сушильный шкаф и др.
При наличии отдельной препараторской комнаты ее используют для подготовки, упаковки посуды и другой подсобной работы.
В регистратуре или части помещения, ее заменяющей, принимают и регистрируют материал, поступающий для исследования, и выдают заключения микробиологического исследования.
Виварий – помещение для содержания экспериментальных животных, имеется только в больших лабораториях.
Правила работы и поведения в микробиологической лаборатории
1. К работе в бактериологической лаборатории допускаются лица не моложе 18 лет, не имеющих противопоказаний по состоянию здоровья и прошедшие вводный инструктаж.
2. Все работники подвергаются профилактическим прививкам, главным образом против кишечных инфекций.
Каждый сотрудник имеет халат и шапочку; в лаборатории носят сменную обувь.
3.Каждый сотрудник обязан строго соблюдать личную гигиену, содержать в чистоте рабочее место.
4. Поступающий в лабораторию материал регистрируют в специальный журнал и маркируют.
5. Весь поступающий материал для исследования считают инфицированным (заразным). Его ставят на специальный поднос, а емкость с материалом протирают дезинфицирующим раствором снаружи.
6. Переливать исследуемый материал из одной емкости в другую следует над дезинфицирующим раствором. Жидкий материал отсасывают с помощью резинового баллона, надетого на пипетку.
7. При попадании исследуемого материала на руки, стол или другие предметы их обрабатывают дезинфицирующим раствором.
8. По окончании работы руки, инструменты, рабочее место обрабатывают дезинфицирующим раствором. Культуры обезвреживают или, при необходимости, сохраняют в холодильнике, который опечатывают. Материал, требующий продолжения исследования, ставят в термостат, который тоже опечатывают. При хранении патогенных культур в лаборатории их регистрируют в специальном журнале. Указывают количество культур, даты их поступления, пересева, уничтожения.
9. В лаборатории категорически запрещается принимать пищу и курить.
10. В лаборатории ежедневно проводят влажную уборку помещений с применением дезинфицирующих растворов. Еженедельно моют стены, полы, инвентарь горячей водой с мылом. Бокс убирают в конце рабочего дня, а перед работой облучают бактерицидными лампами.
Каждое рабочее место лаборанта имеет обязательный комплект оборудования: спиртовку, банку с дезинфицирующим раствором для использованных в работе предметных стекол; банку для хранения чистых, обезжиренных в смеси Никифорова стекол; набор бактериологических петель; лупу 5 – кратного увеличения; микроскоп.
В лаборатории необходимо хранить как минимум недельный запас дезинфицирующих веществ. Дезинфицирующие растворы готовит лаборант. На емкости с дезинфицирующим раствором должны быть указаны его название, концентрация и дата приготовления.
В Российской Федерации работа с патогенными для человека микроорганизмами строго регламентирована пакетом Санитарных правил
Режим работы в лабораториях зависит от степени опасности заражения для лиц, работающих с болезнетворными микроорганизмами или материалом, их содержащим.
Микроорганизмы по степени опасности заражения разделены на четыре группы:
I. Возбудители чумы.
II. Возбудители высококонтагиозных эпидемических заболеваний (холера, бруцеллез, туляремия, сибирская язва, сап, мелиоидоз, лептоспироз).
III. Возбудители эпидемических бактериальных инфекций: кишечных (брюшной тиф, паратифы А и В, дизентерия), туберкулеза, дифтерии, коклюша, менингита, гонореи, листериоза, трахомы, лепры; патогенные анаэробы, спирохеты (возбудители эпидемического возвратного тифа и сифилиса) и др.
IV. Сальмонеллы, протей, эшерихии, клебсиеллы, гемоглобинофильные бактерии, стафилококки, стрептококки возбудители газовой гангрены и др.
С материалом, возможно зараженным возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) I и II групп, и с культурами микроорганизмов этих групп работают в специальных лабораториях с разрешения органов здравоохранения РФ. С возбудителями, относящимися к III группе,— в лабораториях ГСЭН, больниц и др., к IV группе — во всех микробиологических лабораториях.
Большое значение для микробиологического исследования имеет техника взятия исследуемого материала и способ доставки его в лабораторию. Любой материал должен быть собран в стерильную посуду с соблюдением условий, предохраняющих его от загрязнения посторонней микрофлорой.
Доставку исследуемого материала в лабораторию производят в кратчайший срок в специальных металлических биксах, контейнерах, пеналах. Материал, содержащий микроорганизмы, малоустойчивые во внешней среде, переносят в специальных сосудах, в которых поддерживается температура 37°С, при доставке вирусного материала используют термосы со льдом для создания низкой температуры.