- •Введение
- •Микроорганизмов
- •1. Принципы систематизации и классификации микробов.
- •2. Идентификация микроорганизмов
- •3.1.2. Определение чистоты выделенной культуры.
- •3.1.3. Культуральные признаки.
- •А. Рост на плотных питательных средах.
- •Б. Рост на жидких питательных средах.
- •Б. Окраска препарата по Граму.
- •3.2.2. Методы исследования живых клеток. А. Препарат «раздавленная капля»
- •Б. Препарат «висячая капля».
- •В. Препарат «отпечаток»
- •3.2.3. Цитохимические методы исследования строения микробов а. Окраска капсул и приготовление красителей а) Окраска капсул
- •Б) Приготовление красителей для окраски капсул.
- •Б. Определение кислотоустойчивости бактерий.
- •В. Окраска спор и приготовление реактивов. А) Окраска спор
- •Б) Реактивы для окрашивания спор бактерий
- •Г. Окраска жгутиков а) Приготовление препарата
- •Б) Методы окрашивания.
- •В) Реактивы для окраски жгутиков.
- •Д. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •Препараты для окрашивания включений.
- •Е. Выявление нуклеоида и приготовление реактивов а) Методы выявления
- •Б) Реактивы для выявления нуклеоида.
- •3.3. Определение физиолого-биохимических характеристик.
- •3.3.1. Отношение к кислороду
- •3.3.2. Отношение к температуре
- •3.3.3. Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
- •3.3.4. Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
- •Д. Ввыявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
- •Б) Применяемые реактивы.
- •Е. Определение ферментов бактерий. А) Определение липазы
- •Б) Определение каталазы.
- •Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
- •З. Определение интенсивности кислотообразования.
- •И. Выявление аммиака.
- •1. Грамотрицательные формы
- •1.1. Грамотрицательные бактерии, не образующие спор
- •1.1.1. Скользящие бактерии
- •1.1.2. Почкующиеся и (или) стебельковые бактерии
- •1.1.3. Извитые бактерии
- •1.1.4. Спиральные и изогнутые бактерии
- •1.2. Грамотрицательные аэробные палочки
- •1.3. Крупные овальные или палочковидные клетки, свободноживущие аэробные азотфиксаторы
- •1.4. Бактерии, использующие метан и метиловый спирт
- •1.5. Солелюбивые палочки и кокки
- •1.6. Роды с неясным систематическим положением (аэробные овальные кокки и палочки)
- •1.7. Факультативно-анаэробные палочки
- •1.8. Роды с неясным систематическим положением
- •1.9. Грамотрицательные кокки и коккобациллы
- •1.10. Грамотрицательные анаэробные кокки
- •1.11. Грамотрицательные аэробные хемолитотрофные бактерии
- •1.12. Грамотрицательные облигатно-анаэробные палочки, образующие метан
- •1.13. Риккетсии
- •1.14. Микоплазмы
- •2. Грамположительные формы
- •2.1. Грамположительные аспорогенные палочковидные бактерии
- •2.2. Палочки и (или) коккобактерии аэробы или микроаэрофилы неясного систематического положения
- •2.3. Палочки и кокки, образующие эндоспоры
- •2.4. Грамположительные кокки
- •2.5. Актиномицеты и родственные им организмы
- •2.5.1. Секция 1. Паразиты и патогены человека и животных.
- •2.5.2. Секция II. Фитопатогенные бактерии
- •2.5.3. Секция III. Непатогенные каринобактерии
- •2.6. Бактерии с многогнездовыми спорангиями
- •2.7. Актинопланы
- •2.8. Стрептомицеты
- •Список литературы
- •Оглавление
Б) Приготовление красителей для окраски капсул.
Синька Леффлера. Насыщенный спиртовой раствор метиленовой сини: 1,6 г метиленового синего растворяют в 100 мл 95%-го этилового спирта.
30 мл насыщенного спиртового раствора метиленового синего смешивают со 100 мл 0,01%-го раствора КОН.
Раствор КОН: 0,01 г КОН развести в 99,99 мл дист. воды.
Раствор сафраина. 3 г сафраина смешать с 97 мл дистиллированной воды, довести до кипения, профильтровать. Краска готовится перед употреблением.
Формалиновый раствор генцианвиолета. 15-20 г генцианвиолета растворить в 100 мл 40%-го формалина, оставить на 6-8 часов при комнатной температуре, профильтровать, после чего он готов к употреблению.
Краситель Романовского-Гимза. Готовый реактив разводят перед употреблением: 1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды.
Смесь Никифорова. Этиловый спирт и серный эфир в равных объемах.
Комбинированная краска по Муромцеву. Первый раствор - фуксин основной - 0,15 г, спирт этиловый 96%-й - 20 мл, карболовая кислота кристаллическая (фенол) - 10 г. Второй раствор - метиленовый голубой - 2,5 г, вода дистиллированная - 200 мл. Оба раствора смешивают и фильтруют через бумажный фильтр.
Б. Определение кислотоустойчивости бактерий.
Кислотоустойчивость - свойство, характерное для некоторых микобактерий и нокардий. Оно заключается в сохранении окраски клетками этих бактерий при обработке их кислотой. Кислотоустойчивость связана с особенностью химического состава клеточной стенки этих бактерий: в ней содержится много сложных липидов и миколовых кислот.
На обезжиренном предметном стекле готовят два мазка: исследуемых клеток и клеток кислотоустойчивых микобактерий. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют в пламени горелки. На препарат помещают фильтровальную бумагу и заливают карболовым фуксином Циля и затем 2-3 раза подогревают его до появления паров, держа стекло высоко над пламенем горелки. За появлением паров наблюдают, глядя на мазок сбоку; при их появлении тотчас отставляют препарат в сторону. После этого препарату дают остыть, снимают фильтровальную бумагу, сливают краситель и мазок промывают водой. Затем препарат обесцвечивают 5%-ой серной кислотой. Для этого предметное стекло 2-3 раза погружают в стакан с кислотой, не задерживая его в ней. Препарат вновь тщательно промывают водой и докрашивают 3-5 минут синькой Леффлера. Краску сливают, препарат промывают водой, высушивают и исследуют с иммерсией. Кислотоустойчивые клетки приобретают красный цвет, тогда как некислотоустойчивые - синий. Кислотоустойчивость можно определять у клеток любого возраста.
Реактивы для определения кислотоустойчивости.
Фуксин Циля. 5 %-й раствор свежеперегнанного фенола 100%, насыщенный спиртовой раствор фуксина основного - 10 мл. Приготовленную смесь отфильтровывают через 48 часов. Краситель устойчив при хранении.
Другой способ получения фуксина Циля: фуксин основной - 1 г, фенол кристаллический - 5 г, спирт 96 %-й - 10 мл, глицерин - несколько капель, вода дистиллированная - 100 мл. Основной фуксин растворяют в этаноле, затем добавляют растворенный в воде фенол. Раствор перемешивают и оставляют на несколько дней. Перед использованием его фильтруют.