- •Введение
- •Микроорганизмов
- •1. Принципы систематизации и классификации микробов.
- •2. Идентификация микроорганизмов
- •3.1.2. Определение чистоты выделенной культуры.
- •3.1.3. Культуральные признаки.
- •А. Рост на плотных питательных средах.
- •Б. Рост на жидких питательных средах.
- •Б. Окраска препарата по Граму.
- •3.2.2. Методы исследования живых клеток. А. Препарат «раздавленная капля»
- •Б. Препарат «висячая капля».
- •В. Препарат «отпечаток»
- •3.2.3. Цитохимические методы исследования строения микробов а. Окраска капсул и приготовление красителей а) Окраска капсул
- •Б) Приготовление красителей для окраски капсул.
- •Б. Определение кислотоустойчивости бактерий.
- •В. Окраска спор и приготовление реактивов. А) Окраска спор
- •Б) Реактивы для окрашивания спор бактерий
- •Г. Окраска жгутиков а) Приготовление препарата
- •Б) Методы окрашивания.
- •В) Реактивы для окраски жгутиков.
- •Д. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •Препараты для окрашивания включений.
- •Е. Выявление нуклеоида и приготовление реактивов а) Методы выявления
- •Б) Реактивы для выявления нуклеоида.
- •3.3. Определение физиолого-биохимических характеристик.
- •3.3.1. Отношение к кислороду
- •3.3.2. Отношение к температуре
- •3.3.3. Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
- •3.3.4. Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
- •Д. Ввыявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
- •Б) Применяемые реактивы.
- •Е. Определение ферментов бактерий. А) Определение липазы
- •Б) Определение каталазы.
- •Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
- •З. Определение интенсивности кислотообразования.
- •И. Выявление аммиака.
- •1. Грамотрицательные формы
- •1.1. Грамотрицательные бактерии, не образующие спор
- •1.1.1. Скользящие бактерии
- •1.1.2. Почкующиеся и (или) стебельковые бактерии
- •1.1.3. Извитые бактерии
- •1.1.4. Спиральные и изогнутые бактерии
- •1.2. Грамотрицательные аэробные палочки
- •1.3. Крупные овальные или палочковидные клетки, свободноживущие аэробные азотфиксаторы
- •1.4. Бактерии, использующие метан и метиловый спирт
- •1.5. Солелюбивые палочки и кокки
- •1.6. Роды с неясным систематическим положением (аэробные овальные кокки и палочки)
- •1.7. Факультативно-анаэробные палочки
- •1.8. Роды с неясным систематическим положением
- •1.9. Грамотрицательные кокки и коккобациллы
- •1.10. Грамотрицательные анаэробные кокки
- •1.11. Грамотрицательные аэробные хемолитотрофные бактерии
- •1.12. Грамотрицательные облигатно-анаэробные палочки, образующие метан
- •1.13. Риккетсии
- •1.14. Микоплазмы
- •2. Грамположительные формы
- •2.1. Грамположительные аспорогенные палочковидные бактерии
- •2.2. Палочки и (или) коккобактерии аэробы или микроаэрофилы неясного систематического положения
- •2.3. Палочки и кокки, образующие эндоспоры
- •2.4. Грамположительные кокки
- •2.5. Актиномицеты и родственные им организмы
- •2.5.1. Секция 1. Паразиты и патогены человека и животных.
- •2.5.2. Секция II. Фитопатогенные бактерии
- •2.5.3. Секция III. Непатогенные каринобактерии
- •2.6. Бактерии с многогнездовыми спорангиями
- •2.7. Актинопланы
- •2.8. Стрептомицеты
- •Список литературы
- •Оглавление
Б. Рост на жидких питательных средах.
Различают следующие формы роста бактерий на жидких питательных средах:
Помутнение среды. Такой рост характерен для многих патогенных микробов, относящихся к группе факультативных анаэробов.
Придонный рост. Характеризуется образованием осадка на дне пробирки. Он может быть скудным или обильным, крошковидным, гомогенным, волокнистым или в виде крупных рыхлых хлопьев. Консистенция осадка бывает вязкая, слизистая, хрупкая или пастообразная. Если культура не образует пигмента, то цвет среды не изменяется и осадок приобретает серовато-белый или желтоватый цвет. Придонный рост характерен для бактерий с анаэробным типом дыхания.
Пристеночный рост бактерий выражается в том, что питательная среда, находящаяся в пробирке, остаётся прозрачной. Бактерии растут в виде крупных рыхлых хлопьев или компактных зёрен, прикреплённых к внутренней поверхности стенок пробирки.
Поверхностный рост бактерий характеризуется появлением на поверхности жидкой питательной среды плёнки. Плёнка может быть тонкой, бесцветной, исчезающей при встряхивании или взбалтывании, влажной, вязкой, слизистой, плотной, сухой, при взятии с неё материала сниматься целиком в виде круглого диска. Нередко рост микроорганизмов в жидкой питательной среде сопровождается появлением газа и запаха.
3.2. Исследование морфологических свойств микробов.
3.2.1. Приготовление фиксированного препарата
и окраска его по Граму.
А. Приготовление фиксированного препарата.
Препараты бактерий готовят на предметных стеклах, которые должны иметь толщину, не превышающую 1,2-1,4 мм. Поверхность стекла должна быть тщательно очищена и обезжирена. В повседневной работе достаточно натереть сухое чистое стекло сухим хозяйственным мылом, после чего тщательно протереть сухой хлопчатобумажной салфеткой; на хорошо обезжиренном стекле капля воды равномерно расплывется (не сохраняет каплевидную форму).
На обезжиренное предметное стекло наносят небольшую каплю водопроводной воды и переносят в неё профламбированной (стерильной) биологической петлей незначительное количество исследуемого материала. Биомассу бактерий вращательным движением петли растирают в капле воды на площади примерно 4 см 2. Слой должен быть настолько тонким, что мазок высыхает почти сразу после приготовления.
Высушивание мазка следует проводить при комнатной температуре на воздухе. Если оно замедлено, то препарат можно слегка нагреть в токе теплого воздуха высоко над пламенем горелки, держа стекло мазком вверх. Эту операцию следует проводить крайне осторожно, не перегревая препарат, иначе клетки микроорганизмов деформируются.
Фиксация мазка преследует несколько целей: убить микроорганизмы, приклеить их к стеклу, обеспечить лучшее окрашивание. Для того, чтобы зафиксировать мазок, нужно три раза провести предметное стекло через самую горячую часть пламени горелки, держа его мазком вверх.
Б. Окраска препарата по Граму.
На зафиксированный мазок помещают фильтровальную бумажку и наносят краситель генцианвиолет на 1,5-2 мин. (на этой стадии операции необходимо следить, чтобы краситель проходил на мазок через фильтр). Далее фильтровальную бумагу убирают и наносят на мазок раствор Люголя также на 1,5-2 мин. Раствор Люголя сливают и обрабатывают мазок 96%-м этиловым спиртом в течение 30 сек. Затем мазок промывают водой, докрашивают фуксином Циля (1,5-2 мин.) и промывают водой до «светлой капли». Далее мазок высушивают, наносят на него иммерсионное масло и изучают в микроскопе при увеличении объектива 90х.