- •Введение
- •Микроорганизмов
- •1. Принципы систематизации и классификации микробов.
- •2. Идентификация микроорганизмов
- •3.1.2. Определение чистоты выделенной культуры.
- •3.1.3. Культуральные признаки.
- •А. Рост на плотных питательных средах.
- •Б. Рост на жидких питательных средах.
- •Б. Окраска препарата по Граму.
- •3.2.2. Методы исследования живых клеток. А. Препарат «раздавленная капля»
- •Б. Препарат «висячая капля».
- •В. Препарат «отпечаток»
- •3.2.3. Цитохимические методы исследования строения микробов а. Окраска капсул и приготовление красителей а) Окраска капсул
- •Б) Приготовление красителей для окраски капсул.
- •Б. Определение кислотоустойчивости бактерий.
- •В. Окраска спор и приготовление реактивов. А) Окраска спор
- •Б) Реактивы для окрашивания спор бактерий
- •Г. Окраска жгутиков а) Приготовление препарата
- •Б) Методы окрашивания.
- •В) Реактивы для окраски жгутиков.
- •Д. Окраска включений клеток микроорганизмов
- •Препараты для окрашивания включений.
- •Е. Выявление нуклеоида и приготовление реактивов а) Методы выявления
- •Б) Реактивы для выявления нуклеоида.
- •3.3. Определение физиолого-биохимических характеристик.
- •3.3.1. Отношение к кислороду
- •3.3.2. Отношение к температуре
- •3.3.3. Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
- •3.3.4. Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
- •Д. Ввыявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
- •Б) Применяемые реактивы.
- •Е. Определение ферментов бактерий. А) Определение липазы
- •Б) Определение каталазы.
- •Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
- •З. Определение интенсивности кислотообразования.
- •И. Выявление аммиака.
- •1. Грамотрицательные формы
- •1.1. Грамотрицательные бактерии, не образующие спор
- •1.1.1. Скользящие бактерии
- •1.1.2. Почкующиеся и (или) стебельковые бактерии
- •1.1.3. Извитые бактерии
- •1.1.4. Спиральные и изогнутые бактерии
- •1.2. Грамотрицательные аэробные палочки
- •1.3. Крупные овальные или палочковидные клетки, свободноживущие аэробные азотфиксаторы
- •1.4. Бактерии, использующие метан и метиловый спирт
- •1.5. Солелюбивые палочки и кокки
- •1.6. Роды с неясным систематическим положением (аэробные овальные кокки и палочки)
- •1.7. Факультативно-анаэробные палочки
- •1.8. Роды с неясным систематическим положением
- •1.9. Грамотрицательные кокки и коккобациллы
- •1.10. Грамотрицательные анаэробные кокки
- •1.11. Грамотрицательные аэробные хемолитотрофные бактерии
- •1.12. Грамотрицательные облигатно-анаэробные палочки, образующие метан
- •1.13. Риккетсии
- •1.14. Микоплазмы
- •2. Грамположительные формы
- •2.1. Грамположительные аспорогенные палочковидные бактерии
- •2.2. Палочки и (или) коккобактерии аэробы или микроаэрофилы неясного систематического положения
- •2.3. Палочки и кокки, образующие эндоспоры
- •2.4. Грамположительные кокки
- •2.5. Актиномицеты и родственные им организмы
- •2.5.1. Секция 1. Паразиты и патогены человека и животных.
- •2.5.2. Секция II. Фитопатогенные бактерии
- •2.5.3. Секция III. Непатогенные каринобактерии
- •2.6. Бактерии с многогнездовыми спорангиями
- •2.7. Актинопланы
- •2.8. Стрептомицеты
- •Список литературы
- •Оглавление
3.3.3. Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
Этот тест направлен на определение характера использования бактериями данного углевода (обычно глюкозы) путем окисления, путем сбраживания или не используется совсем. Применяемая среда состоит из пептона, агара, NaCl, K2HPO4, какого-либо углевода и индикатора (обычно бромтимоловый синий). Для анализа готовят две пробирки со средой, из которой удален воздух. Обе пробирки засевают исследуемым материалом. Затем одну из них с целью создания в ней анаэробных условий заливают стерильным жидким вазелиновым маслом или парафином (слой примерно 1 см). Обе пробирки термостатируют. Кислотообразование (пожелтение среды) в не залитой парафином пробирке указывает, что углевод используется путем окисления, тогда как этот же процесс в анаэробных условиях означает, что углевод используется путем сбраживания.
3.3.4. Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
Названные характеристики определяют посевом уколом в полужидкие питательные среды Гисса с углеводами глюкозой, сахарозой, лактозой, мальтозой и маннитом и индикатором (среды могут быть жидкими, со стеклянными поплавками на дне пробирок, заполненными питательной средой). Пробирки термостатируют 2-4 суток (или 7-10 для медленно развивающихся форм). Отмечают визуальные признаки развития микроба и изменение окраски индикатора, а также наличие пузырьков газа. На основании полученных результатов делают вывод о том, какие углеводы ассимилирует данный микроб и с образованием каких продуктов.
3.3.5. Протеолитические свойства.
А. Разжижение желатина.
Культуру исследуемого микроба высевают уколом в столбик с РПЖ, инкубируют 4 суток при комнатной температуре. Затем отмечают наличие разжижения и его характер: послойный, воронкообразный, пузырчатый.
Б. Протеолиз казеина.
Исследуемую культуру засевают на среду Эндо с молоком. Бактерии, обладающие протеолитической активностью, после термостатирования вызывают просветление вокруг колоний.
В. Обнаружение аммиака.
Высевают исследуемую культуру в РПБ и под пробку укрепляют полоску красной лакмусовой бумаги так, чтобы она не касалась среды. Пробку оборачивают полиэтиленом, чтобы затруднить улетучивание аммиака. Посев термостатируют 2 суток при 37С. При образовании аммиака красный лакмус синеет.
Г. Выявление сероводорода.
Для обнаружения сероводорода делают посев уколом в среду РПА с 5% пептона и 0,25% уксуснокислого свинца. Посев термостатируют 7-10 суток при 37С. При наличии сероводорода среда чернеет вдоль укола.
Возможно использование индикаторной бумажки, смоченной раствором уксуснокислого синца и укрепленной под пробкой в пробирке с посевом в столбик РПА. После термостатирования в течение 7-10 суток бумажка темнеет.
Д. Ввыявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
Метод Мореля. В питательную среду (РПБ + 0,01% триптофана) сеют исследуемую культуру. Затем в пробирку подвешивают индикаторную бумажку, смоченную щавелевой кислотой, так, чтобы бумага не касалась среды. Инкубируют 24 часа при 37С. При образовании индола нижняя часть бумаги окрашивается в красный цвет.
Метод Легаль-Вейля. Этот метод наиболее чувствителен. К суточной или двухсуточной бульонной культуре добавляют 5 капель 5%-го раствора нитропруссида натрия, 5 капель 40%-го раствора NaCl и 7 капель концентрированной уксусной кислоты. В присутствии индола появляется сине-зеленое или темно-синее окрашивание.
Метод Сальковского. К 10 мл исследуемого материала добавляют 1 мл 0,2%-го раствора KNO2 и несколько капель крепкой серной кислоты. При взаимодействии этих соединений с индолом получается красно-фиолетовое окрашивание.
Выявление с парадиметиламидобензальдегидом. К 10 мл исследуемого материала добавляют 5 мл парадиметиламидобензальдегида и 5 мл насыщенного раствора сульфата калия. При наличии индола возникает интенсивное красное окрашивание.