1.5. Необходимые материалы:

8 флаконов с концентрированной питательной средой, 3 пробирки с нормальной средой Кесслера или Эйкмана, чашки со средой Эндо или со средой Эндо с молоком, реактив для определения оксидазной активности, среды Гисса полужидкие столбиком с глюкозой, сахарозой, лактозой, среда с триптофаном, реактив Эрлиха или индикаторная бумажка, смоченная щавелевой кислотой, метиленовый красный, среда Козера или Симмонса, КОН 40 %, среда для аммонификации мочевины, индикаторная бумажка красный лакмус или реактив Несслера.

Среда Эйкмана – глюкозо-пептонная среда

Приготовление концентрированной среды: 100 г глюкозы, 100 г пептона, 50 г NaCL, 1 литр дистиллированной воды.

Приготовление нормальной среды: концентрированную среду разбавляют в 10 раз: 10 г глюкозы, 10 г пептона и 5 г NaCL, 1 литр дистиллированной воды.

В том и другом случае растворяют компоненты при подогревании, кипятят, фильтруют, прибавляют глюкозу, доводят объем до 1 л, устанавливают рН 7,4. Нормальную среду разливают в колбы по 10 мл. стерилизуют дробно 3 дня по 30 мин. В пробирки и колбы помещают поплавки или кусочки стерильной ваты (поролона).

Среда Кесслера - лактозо-пептонная среда.

К 1 л водопроводной воды добавляют 10 г пептона и 50 мл бычьей желчи. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании 20-30 минут, затем фильтруют через вату, добавляют 10 г лактозы, объем доводят до литра, устанавливают рН 7,4-7,6 и добавляют 4 мл 1 % водного раствора генцианвиолета. Среду разливают в пробирки с поплавками или кусочками стерильной ваты и стерилизуют дробно 3 суток по часу или 15 минут при 120º С. Для приготовления концентрированной среды концентрацию сухих веществ берут в 10 раз больше.

Среда Эндо с молоком. К среде Эндо добавляют 20 % обезжиренного стерильного молока.

Индикатор Андреде. 1 г кислого фуксина вносят в 200 мл дист. воды и взбалтывают до растворения. После этого добавляют 32 мл 1н. раствора NaOH. Через 2-4 часа индикатор готов. Индикатор имеет следующий цвет в зависимости от рН:

Таблица 9.

Зависимость цвета индикатора от рН среды

РН	Цвет индикатора
7,4 и выше	Оранжевый
7,0-7,2	Бледно-розовый
7,0 и ниже	красный

Способность бактерии расщеплять мочевину.

E. coli мочевину не расщепляет, а фекальные формы обладают таким свойством. Для определения способности бактерий расщеплять мочевину используют среду следующего состава: г/л/ NH₂/₂СО – мочевина 5,0 К₂НРО₄ – 0,5, яблочнокислый, лимоннокислый или виннокислый Na – 5,0. Мочевину и остальную среду стерилизуют отдельно при 0,5 атм. Среду разливают тонким слоем, после засева, под пробкой укрепляют стерильную полоску красной лакмусовой бумаги. Продолжительность культивирования 3-5 суток. Образование аммиака обнаруживают по изменению цвета красной лакмусовой бумажки, или можно провести реакцию разложенной жидкости с реактивом Несслера. При добавлении к капле разложенной жидкости капли реактива Несслера появляется коричнево-желтое окрашивание или выпадает осадок.