Нестандартные методы санитарно-микробиологических исследований воды.

1.3.3. Трехэтапный бродильный метод

I-й этап не отличается от предыдущего при двухэтапном бродильном методе.

II-й этап. Из сосудов с признаками роста – помутнение или помутнение и газ, петлей с тонким ушком производят посев на сектор питательной среды Эндо с таким расчетом, чтобы получился рост изолированных колоний. Посевы выращивают при температуре 37º С 24 часа. При отсутствии роста дается окончательный отрицательный ответ. При наличии типично окрашенных и бесцветных колоний из них делают мазки и красят по Граму. Если в мазках обнаруживаются грамотрицательные, неспоровые палочки, переходят к III-му этапу исследования.

III-й этап. Из типичных колоний, исследованных под микроскопом, производят посев в разведенную ГПС. Посевы выращивают 24 часа при температуре43º С. наличие в пробирках только помутнения дает право на отрицательный ответ, если же в пробирках обнаруживаются помутнение и газ (на среде Эйкмана – только газ), то это дает основание для положительного ответа.

1.3.4. Бродильный метод по Звенигородской

Высевают 311,1 мл воды в 6 бродильных сосудов с ГПС – в три флакона по 100 мл, и в 3 пробирки – в первую – 10 мл, во вторую – 1 мл. в третью – 0,1 мл. посевы термостатируют 24 часа при температуре 43º С. При наличии кислоты и газа результат считается положительным. Титр-коли определяют по таблице 8.

Эта схема анализа пригодна для посева воды из источников для централизованного водоснабжения, она может быть рекомендована для бактериологического исследования чистых вод из источников местного водоснабжения (колодцы, родники, каптажи), в том числе после обеззараживания их хлорированием. По этой схеме можно производить бактериологический контроль воды плавательных бассейнов, безалкогольных и слабоалкогольных напитков по ходу производственного процесса.

1.3.5. Метод прямого посева (метод Марманна)

Метод не очень точен, требует тщательного приготовления разведений воды для посевов. Этот метод может использоваться только для нехлорированной сточной воды и воды сильно загрязненных открытых водоемов.

1 мл различных разведений воды равномерно распределяют по поверхности застывшей питательной среды Эндо в чашках Петри, которую оставляют открытой или не полностью закрытой в стерильном боксе на 1 час. Подсушенные чашки закрывают и помещают в термостат на 24 часа при температуре 37º С, после чего подсчитывают колонии, характерные для кишечной палочки и вычисляют титр коли.

1.3.6.Ускоренный метод анализа воды (метод Рублевской водонапорной станции)

Этот метод позволяет сократить срок полного санитарно-микробиологического анализа воды с 48 до 16 часов.

Исследуемый объем воды фильтруют в аппарате Зейтца через мембранный ультрафильтр № 3. Чашки с застывшей средой Эндо прогревают 10-15 минут при 40-45º С, на прогретую среду помещают мембранный ультрафильтр. Посев проращивают 10-12 часов при 40-41º С. Среди выросших колоний отбирают оксидазоотрицательные, из материала которых готовят мазки и окрашивают по Граму. Колонии, в которых обнаружены грамотрицательные бесспоровые палочки, засевают в ГПС с индикатором Андреде, разлитую по 1 мл в маленькие пробирки. После посевов в пробирки вносят стерильные ватные тампоны и закрывают ватными пробками. Посевы выращивают при 43º С 2-4 часа. Микробы кишечной группы сбраживают глюкозу с образованием кислоты и газа. Поэтому под ватным тампоном собираются пузырьки газа и изменяется цвет среды. Отсутствие кислоты и газа дает отрицательное заключение на фекальное загрязнение исследуемой воды. Полную характеристику выделенных штаммов кишечной палочки получают, изучая посевы на дифференциально-диагностических средах, используя микропипетки с ватными тампонами.