1.3.2. Двухэтапный бродильный метод определения коли-титра воды.

I-й этап. Накопление бактерий кишечной группы на глюкозо-пептонной среде (ГПС).

Различные объемы исследуемой воды (100, 10, 1, 0,1 мл) в зависимости от предполагаемой загрязненности засевают в серию бродильных сосудов с ГПС (колб, бутылей или пробирок с поплавками). Количество воды для посева в бродильные сосуды определяют по таблице:

Таблица 7.

Схема отбора проб и посева воды.

Вода	Объем воды для исследования, мл	Объем засеваемой воды, мл
Водопроводная Артезианская	500-300	КТ: 100-100-100-100 и 10 объемов по ТО; КТ: 100-100 и 10 объемов по 10
Родников и грунтовых колодцев	111,1	КТ: 100-10-1-0,1 МЧ: 1,0-0,1
Из открытых водоемов	11,11	КТ: 10-1-0,1-0,01-0,001-0,0001-0,00001-0,000001 МЧ: два разведения 0,1 и 0,01 или 0,01 и 0,001
Сточная до очистки	0,001	КТ: 0,001-0,0001-0,00001-0,000001 МЧ: 0,01-0,0001
Сточная вода после очистки	0,001	КТ: 1,0-0,1-0,01-0,001 МЧ: 0,1-0,01-0,001 и меньше
Примечание: КТ – коли-титр, МЧ – микробное число.

Посевы воды в объеме 10 и 100 мл производят соответственно в 1 и 10 мл концентрированной среды. Воду в объеме 1 мл и меньше засевают в пробирки со средой нормального состава. Сосуды осторожно встряхивают и выращивают до 24-х часов при температуре 42-43º С. Посев объемов менее 1 мл не допускается, для посева используют разведения в стерильной воде.

II-й этап. Выращивание посевов на дифференциальном агаре с розоловой кислотой (РДА по Киченко).

Через 7-12 часов инкубации посевы на ГПС просматривают, отмечают признаки роста бактерий – муть и газообразование и независимо от наличия или отсутствия признаков роста из всех сосудов петлей с крупным ушком производят посев уколом и штрихом в скошенный столбик РДА. Посевы выращивают при 37º С в течение 12-17 часов от момента посева воды на ГПС. (посевы в бродильных сосудах продолжают выращивать до 24-х часов с момента заражения при 42-43º С). Если в высевах из этих сосудов на РДА через 7-12 часов роста бактерий нет, то повторно высевают из всех бродильных сосудов на РДА и выращивают 10-12 часов при 37º С.

Спустя 24 часа после посева воды и 12 часов после пересева просматривают РДА и отмечают признаки роста: на ГПС появляется муть и газообразование или только помутнение. На скошенной поверхности РДА – изолированные желтые колонии или рост в виде желтого штриха на пожелтевшей поверхности среды, столбик РДА окрашивается в желтый цвет с разрывами, конденсационная жидкость вспенивается. Для подтверждения наличия кишечной палочки готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Паракишечные палочки. В глюкозо-пептонной среде наблюдается помутнение и газ или только помутнение. На скошенной поверхности – серые колонии или серый штрих, цвет среды на скошенной части не изменяется, иногда в результате образования щелочи отмечается малиновый оттенок, а в столбике РДА желтый цвет с разрывами, пена в конденсационной жидкости, в мазках – грамотрицательные бесспоровые палочки.

Выявление кишечных палочек в воде после хлорирования. При росте на ГПС наблюдается помутнение и газ или только помутнение, на РДА – серые колонии, не изменяющие цвет среды и не дающие газообразования. Микробы слабоподвижные, грамотрицательные.

Природные воды и воды после очистки. Результат посева считается отрицательным, если в глюкозо-пептонной среде наблюдается помутнение и газ, или только помутнение, но РДА не изменяется.

В случаях, не требующих отлагательства, можно ограничиться только проведением бродильного теста (I-й этап) на среде Эйкмана при 43º С в течение 18-ти часов (совпадение с коли-титром в 99 % случаев).

Значение коли-титра и коли-индекса находят по таблицам, составленным на основании статистических расчетов, определяющих вероятное распределение кишечных палочек в исследуемой воде.

Таблица 8.

Таблица для определения коли-титра и коли-индекса водопроводной воды.

Количество положительных результатов при анализе воды в:			Коли-индекс	Коли-титр	Количество положительных результатов при анализе воды в:			Коли-индекс	Коли-титр
3-х флаконах по 100 мл	3-х пробирках по 10 мл	3-х пробирках по 1 мл			3-х флаконах по 100 мл	3-х пробирках по 10 мл	3-х пробирках по 1 мл
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10
0	0	0	Менее	Более	2	2	1	28	86
0	0	1	3	333	3	0	1	39	26
0	1	0	3	333	3	0	2	64	16
1	0	0	4	250	3	1	0	43	23
1	0	1	7	143	3	1	1	75	13
1	1	0	7	143	3	1	2	120	8
1	1	1	11	91	3	2	0	93	11
1	2	0	11	91	3	2	1	150	7
2	0	0	9	111	3	2	2	210	5
2	0	1	14	72	3	3	0	240	4
2	1	0	15	67	3	3	1	460	2
2	1	1	20	50	3	3	2	1100	0,9
2	2	0	21	48	3	3	3	Более	Менее
					3	0	0	23	43