Построение калибровочной кривой

В несколько проб морепродукта, каждая массой по 40 г не обработанных антибиотиком вносят различные количества антибиотика: 5; 2,5; 0,25 и 0,12 мкг/г. Пробы тщательно перемешивают и оставляют на сутки при температуре 3-4⁰С для контактирования с антибиотиком, затем каждую пробу экстрагируют цитратсолянокислым буфером. Далее в фильтратах определяют концентрацию антибиотика методом диффузии в агар (методом агаровых колодцев), как описано выше.

Измерив диаметры стерильных зон (зоны задержки роста вокруг колодцев), строят график – концентрации антибиотика – диаметр зоны задержки роста. Этот график служит стандартом для определения концентрации тетрациклина.

Нистатин определяют таким же методом, только при этом используют культуры Saccharomyces cerevisiae АТСС № 976 3 или Candida parapsilosis в дрожжевой среде. Для определения применяют фосфатный буфер с рН 6,7-7,0.

Этим методом удается определить до 0,1 мг/г тетрациклина и 40-60 мг/г нистатина.

5.3. Необходимое оборудование для одного студента

2 стерильные чашки Петри, 60 мл стерильного РПА. культура Вас.subtilis или Bac. cereus F, стерильная вода для смыва культуры, стерильные пипетки с градуировкой 0,1 мл, стерильные шпатели Дригальского, стерильный микроизмельчитель или стерильные ступки, стерильный песок и стерильный пестик. Стерильный цитратсолянокислый буфер. Образцы морепродукта, обработанного и необработанного антибиотиком, фильтры бумажные и стеклянные и стерильная колба для фильтрации экстракта, линейка, термостат с температурой 28⁰С, весы.

5.4. Вопросы для самопроверки

1. Что такое антибиотики?

2. Какие требования предъявляются к антибиотикам, используемым в пищевой промышленности?

3. Как определить чувствительность бактерии к антибиотику?

4. Какие антибиотики разрешено использовать для консервирования пищевых продуктов?

5. Опишите определение концентрации антибиотика в морепродукте методом диффузии в агар (методом агаровых колодцев).

Рекомендуемая литература

1. Дутова Е.Н., Гофтарп М.М., Призренова В.И., Сазонова А.С. Техническая микробиология рыбных продуктов. – М., 1976.– 266 с.

2. Кузьмина С.А. Техническая микробиология рыбных продуктов.– Калининград., 1989. – 186с.

3. Мудрецова-Висс К.А. Микробиология. М., Экономика., 1985. – 256 с.

4. Теппер Е.З., Шильникова В.К., Переверзева Г.И. Практикум по микробиологии. М., Агропромиздат., 1987. – 259 с.

5. Общая и санитарная микробиология с техникой микробиологических исследований: Учебное пособие / Под ред. А.С. Лабинской, Л.П. Блинковой, А.С. Ещиной. – М.: Медицина, 2004. – 576 с.

6. Овчарова Т.П., Масленникова Н.М. Антибиотики в пищевой промышленности. – М.: Изд-во «Пищевая пром-сть», 1969. – 102 с.

7. Перетрухина А.Т. , Перетрухина И.В. Микробиология сырья и продуктов водного происхождения: - СПб, ГИОРД, 2005. – 320 с.

8. Перетрухина А.Т., Белокопытова Е.Е. Лабораторный практикум по санитарно-микробиологическому контролю на рыбоперерабатывающих предприятиях: Учеб. пособие. – Мурманск: МВИМУ им. Ленинского комсомола, 1987. – 151 с.

9. Постановление гл. сан. врача РФ «Гигиенические требования к безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. СанПиН 2.3.2.1078-01» от 14 ноября 2001 г. - № 36.

10. Сборник инструкций по борьбе с болезнями рыб. – Часть 1. – М.: Отдел маркетинга АМБ-агро, 1998. – 309 с.