- •Калининград
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Краткие теоретические сведения. Микрофлора воды.
- •Санитарно-показательные организмы
- •1.1. Отбор и транспортировка проб воды в лабораторию.
- •1.2. Санитарно-бактериологические показатели качества воды.
- •Порядок выполнения работы. Определение микробного числа воды.
- •1.3. Определение кишечной палочки в воде. Характеристика кишечной палочки.
- •Определение титра кишечной палочки в воде.
- •1.3.1. Метод мембранных ультрафильтров.
- •1.3.2. Двухэтапный бродильный метод определения коли-титра воды.
- •Нестандартные методы санитарно-микробиологических исследований воды.
- •1.3.3. Трехэтапный бродильный метод
- •1.3.4. Бродильный метод по Звенигородской
- •1.3.5. Метод прямого посева (метод Марманна)
- •1.3.6.Ускоренный метод анализа воды (метод Рублевской водонапорной станции)
- •1.3.7. «Сигнальный» анализ хлорированной воды
- •1.4. Принципы обнаружения в воде патогенных микроорганизмов.
- •1.4.1. Ускоренные методы исследования воды
- •1.5. Необходимые материалы:
- •Способность бактерии расщеплять мочевину.
- •1.6. Контрольные вопросы:
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора воздуха
- •2.2. Отбор проб воздуха
- •2.3. Исследование воздуха на санитарно-показательную микрофлору
- •2.4. Порядок выполнения работы
- •2.4.1. Определение микробного числа методом Коха.
- •2.4.2. Исследование микрофлоры воздуха с помощью прибора Кротова
- •2.4.3. Необходимые материалы
- •2.4.4. Контрольные вопросы
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •3.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора почвы и ее самоочищение
- •3.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •3.2.1. Порядок выполнения работы
- •Подготовка образца почвы для анализа
- •3.2.2. Определение микробного числа почвы
- •3.2.3. Определение титра кишечной палочки почвы
- •3.3. Ускоренный метод исследования кишечной палочки в почве
- •3.3.1. Бродильный метод с использованием ттх
- •3.3.2. Метод мембранных фильтров
- •3.4. Полный санитарно - микробиологический анализ почвы
- •3.4.1. Определение титра Cl. Perfringens
- •3.4.2. Обнаружение в почве протеев
- •3.4.3. Определение e. Coli методом прямого посева.
- •3.4.4. Определение термофильных бактерий
- •3.4.5. Исследование почвы на наличие Cl. Tetani (возбудитель столбняка)
- •3.4.6. Исследование почвы на наличие Cl. Botulinum
- •3.5. Оценка санитарно-микробиологического состояния почвы
- •3.6. Необходимые материалы
- •3.7. Вопросы для самоконтроля
- •Раздел 2 дезинфекция и производственная санитария
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Дезинфекция и производственная санитария
- •2.2. Факторы, влияющие на эффективность мойки и дезинфекции
- •2.2.1. Степень загрязненности
- •2.2.2. Концентрация дезинфицирующего раствора и режим дезинфекции
- •2.2.3. Режим ополаскивания
- •2.2.4. Режим течения моющих растворов
- •2.2.5. Концентрация и температура моющего раствора
- •2.3. Свойства моющих препаратов
- •2.3.1. Моющие препараты
- •2.3.1.1. Щелочные моющие препараты
- •2.3.1.2.Синтетические моющие препараты
- •2.4. Дезинфицирующие вещества
- •2.4.1. Хлорсодержащие дезинфектанты
- •2.4.2. Универсальные препараты
- •2.5. Определение эффективности действия дезинфицирующих препаратов.
- •2.5.1. Порядок выполнения работы
- •2.5.2. Определение бактерицидных свойств растворов дезинфицирующих препаратов
- •2.5.3. Определение фенольного коэффициента
- •2.6. Необходимые материалы:
- •2.7. Вопросы для самопроверки:
- •Раздел 3. Санитарно-гигиенический контроль на пищевом предприятии Глава 3.1. Санитарно-микробиологические анализы на пищевом предприятии
- •3.1.1. Смыв с рук
- •Определение общей обсемененности ладони
- •3.1.2. Определение кишечной палочки
- •3.1.3. Определение золотистого стафилококка
- •3.2. Исследование микрофлоры санитарной одежды.
- •3.3. Исследование микрофлоры технологического оборудования
- •3.3.1. Отбор и анализ смывов с тары для мелкой упаковки
- •3.3.2. Смывы с поверхности упаковочного материала
- •3.3.3. При производстве рыбы холодного и горячего копчения тару исследуют
- •3.4. Необходимые материалы
- •3.5. Вопросы для самопроверки.
- •Раздел 4. Микробиология водного сырья
- •4.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора рыбы-сырца
- •4.2. Микрофлора нерыбных объектов морского промысла
- •4.2.1. Микрофлора свежевыловленных беспозвоночных
- •4.3. Микробиологический анализ рыбы-сырца.
- •4.3.1. Определение общей численности бактерий (мафам)
- •4.3.1.1. Определение общей обсемененности рыбы-сырца бактериями чашечным методом (метод предельных разведений, метод Коха)
- •4.3.1.2. Определение общей обсемененности методом микропластинок (метод Фроста)
- •4.3.1.3. Арбитражный метод определения количества аэробных микроорганизмов.
- •4.3.1.4. Определение бактерий р. Salmonella в рыбе и рыбной продукции
- •4.3.1.5. Определение бактерий группы Proteus по методу Шукевича
- •4.3.1.6. Определение коагулазоположительного стафилококка.
- •4.3.1.7. Определение Vibrio parahaemolyticus (галофильный вибрион)
- •4.3.1.8. Выделение Bacillus cereus
- •4.3.1.9. Выделение Listeria monocytogenes
- •4.3.1.10. Выявление дрожжей и плесневых грибов (гост 10444.12-88)
- •4.4. Необходимые материалы
- •4.5. Микробиологические методы исследования беспозвоночных
- •4.5.1. Порядок выполнения работы
- •Порядок выполнения работы
- •4.5.1.1. Определение общей микробной обсемененности
- •4.5.1.2. Прямые методы.
- •4.5.1.2.1. Рост микробов на предметных стеклах с питательным агаром
- •4.5.1.2.2. Определение санитарно-показательных и патогенных организмов
- •4.5.1.2.3. Энтерококки.
- •4.5.1.2.4. Патогенный стафилококк.
- •4.6. Обработка полученных данных
- •4.6.1. Определение процентного соотношения бактериальных форм в посевах с водного сырья.
- •4.6.2. Выделение бактерий в чистую культуру и определение вида бактерии.
- •4.6.3. Идентификация микроорганизмов
- •4.6.4. Определение морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков бактерий
- •4.6.4.1. Культуральные признаки.
- •А. Рост на плотных питательных средах.
- •Б. Рост на жидких питательных средах.
- •4.6.4.2. Морфологические признаки
- •Метод Фонтана
- •Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •4.6.4.3. Определение физиолого-биохимических признаков Отношение к кислороду
- •Отношение к температуре
- •Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
- •Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
- •Д. Выявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
- •Б) Применяемые реактивы.
- •Е. Определение ферментов бактерий. А) Определение липазы
- •Б) Определение каталазы.
- •Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
- •З. Определение интенсивности кислотообразования.
- •И. Выявление аммиака.
- •4.7. Вопросы для самопроверки
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
- •5.1. Краткие теоретические сведения
- •5.2. Определение концентрации антибиотика в продуктах
- •5.2.1. Определение концентрации антибиотика методом бумажных дисков.
- •5.2.2. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом канавки
- •5.2.3. Определение хлортетрациклина в продуктах
- •Построение калибровочной кривой
- •5.3. Необходимое оборудование для одного студента
- •5.4. Вопросы для самопроверки
- •Рекомендуемая литература
- •Содержание:
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •Раздел 2. Дезинфекция и производственная санитария
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
4.6. Обработка полученных данных
4.6.1. Определение процентного соотношения бактериальных форм в посевах с водного сырья.
Для определения процентного соотношения бактериальных форм в посевах микрофлоры водного сырья необходимо просчитать общее число колоний в чашке Петри (для анализа выбирается одна из чашек анализа по определению КМАФАМ, в которой колонии по возможности не сливаются друг с другом). Далее подсчитывают число колоний с однотипными культуральными признаками. Из каждого типа колоний выполняют мазок и окрашивают по Граму. Далее общее число колоний принимают за 100% и определяют, сколько процентов приходится на каждую морфологическую форму, составив пропорции.
4.6.2. Выделение бактерий в чистую культуру и определение вида бактерии.
Для определения вида бактерий, прежде всего, ее необходимо выделить в чистую культуру. Для этого материал из одной из колоний выращенных на чашке Петри при анализе микрофлоры рыбы или морепродуктов, профламбированной охлажденной биологической петелькой отсевают на свежескошенный стерильный РПА. (для анализа следует выбирать колонию однородную по культуральным признакам и находящуюся на некотором расстоянии от других). Для выявления сероводорода и индола на края пробирки подвешивают бумажки, смоченные уксуснокислым свинцом (на H2S, и щавелевой кислотой – на индол). Посев термостатируют при температуре 370С 24 часа. Далее проверяют чистоту культуры – для этого из материала , выращенного на косом агаре, делают мазок и окрашивают по Граму. Если культура чистая – в мазке будут обнаружены клетки одной морфологической формы. Отмечают способность культуры вырабатывать H2S (бумажка, смоченная уксуснокислым свинцом чернеет, реакция проявляется четко через несколько суток термостатирования) и индол (бумажка, смоченная щавелевой кислотой розовеет).
Далее подробно описывают культуральные признаки, изучают морфологические и физиолого-биохимические признаки бактерии.
4.6.3. Идентификация микроорганизмов
Термин «идентификация» в переводе с латинского «identifico» обозначает отождествление. То есть, речь идет об установлении видовой и вариантной принадлежности микроорганизмов, выделяемых из окружающей среды. Это определение таксономической принадлежности осуществляется путем сопоставления основных, выявленных исследователем признаков у выделенных культур (классификационными признаками микробов, описанных в литературе или определителях). Схема такова: исследователь выделяет микроб в «чистой культуре» - изучает основные характеристики культуры - сопоставляет выявленные признаки с известными таксономическими группами.
Следовательно, идентификация микроба - это заключительный этап любого микробиологического исследования с целью обнаружения микроорганизмов в объектах внешней среды или лабораторной диагностики инфекционной болезни.
Первым шагом идентификации является получение микробов в чистой культуре. В зависимости от изучаемого микроорганизма методы получения чистых культур варьирует от повторных рассевов в чашках Петри на средах общего назначения до выделения изолированных колоний.
Далее описывают культуральные, исследуют морфологические и физиолого-биохимические признаки чистой культуры бактерий. По совокупности всех признаков определяют таксономическую принадлежность бактерии.
Пример. Культуральные признаки: на рыбопептонном агаре бактерия образует серо-белую колонию правильной округлой формы. Колония выпуклая, имеет гладкую поверхность, ровный край и выделяет желто-зеленый пигмент, окрашивающий питательную среду.
Морфологические признаки: бактерия имеет форму палочки, по Граму окрашивается отрицательно, спор не образует, подвижна, имеет полярные жгутики. Капсулу не образует.
Физиолого-биохимические признаки: бактерия - аэроб, усваивает органические соединения (гетеротроф), каталазо- и оксидазоположительная, крахмал не гидролизует, но разлагает глюкозу с образованием кислоты без газа в аэробных условиях.
Обратившись к части методических указаний, в которой перечислены таксономические группировки бактерий, находим раздел «Грамотрицательные бактерии», в этом разделе выбираем бесспоровые палочки, аэробы, гетеротрофы. В соответствии с другими физиолого-биохимическими признаками определяем, что выделенная бактерия относится к семейству Pseudomonadaceae, род Pseudomonas.