- •Калининград
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Краткие теоретические сведения. Микрофлора воды.
- •Санитарно-показательные организмы
- •1.1. Отбор и транспортировка проб воды в лабораторию.
- •1.2. Санитарно-бактериологические показатели качества воды.
- •Порядок выполнения работы. Определение микробного числа воды.
- •1.3. Определение кишечной палочки в воде. Характеристика кишечной палочки.
- •Определение титра кишечной палочки в воде.
- •1.3.1. Метод мембранных ультрафильтров.
- •1.3.2. Двухэтапный бродильный метод определения коли-титра воды.
- •Нестандартные методы санитарно-микробиологических исследований воды.
- •1.3.3. Трехэтапный бродильный метод
- •1.3.4. Бродильный метод по Звенигородской
- •1.3.5. Метод прямого посева (метод Марманна)
- •1.3.6.Ускоренный метод анализа воды (метод Рублевской водонапорной станции)
- •1.3.7. «Сигнальный» анализ хлорированной воды
- •1.4. Принципы обнаружения в воде патогенных микроорганизмов.
- •1.4.1. Ускоренные методы исследования воды
- •1.5. Необходимые материалы:
- •Способность бактерии расщеплять мочевину.
- •1.6. Контрольные вопросы:
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора воздуха
- •2.2. Отбор проб воздуха
- •2.3. Исследование воздуха на санитарно-показательную микрофлору
- •2.4. Порядок выполнения работы
- •2.4.1. Определение микробного числа методом Коха.
- •2.4.2. Исследование микрофлоры воздуха с помощью прибора Кротова
- •2.4.3. Необходимые материалы
- •2.4.4. Контрольные вопросы
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •3.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора почвы и ее самоочищение
- •3.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •3.2.1. Порядок выполнения работы
- •Подготовка образца почвы для анализа
- •3.2.2. Определение микробного числа почвы
- •3.2.3. Определение титра кишечной палочки почвы
- •3.3. Ускоренный метод исследования кишечной палочки в почве
- •3.3.1. Бродильный метод с использованием ттх
- •3.3.2. Метод мембранных фильтров
- •3.4. Полный санитарно - микробиологический анализ почвы
- •3.4.1. Определение титра Cl. Perfringens
- •3.4.2. Обнаружение в почве протеев
- •3.4.3. Определение e. Coli методом прямого посева.
- •3.4.4. Определение термофильных бактерий
- •3.4.5. Исследование почвы на наличие Cl. Tetani (возбудитель столбняка)
- •3.4.6. Исследование почвы на наличие Cl. Botulinum
- •3.5. Оценка санитарно-микробиологического состояния почвы
- •3.6. Необходимые материалы
- •3.7. Вопросы для самоконтроля
- •Раздел 2 дезинфекция и производственная санитария
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Дезинфекция и производственная санитария
- •2.2. Факторы, влияющие на эффективность мойки и дезинфекции
- •2.2.1. Степень загрязненности
- •2.2.2. Концентрация дезинфицирующего раствора и режим дезинфекции
- •2.2.3. Режим ополаскивания
- •2.2.4. Режим течения моющих растворов
- •2.2.5. Концентрация и температура моющего раствора
- •2.3. Свойства моющих препаратов
- •2.3.1. Моющие препараты
- •2.3.1.1. Щелочные моющие препараты
- •2.3.1.2.Синтетические моющие препараты
- •2.4. Дезинфицирующие вещества
- •2.4.1. Хлорсодержащие дезинфектанты
- •2.4.2. Универсальные препараты
- •2.5. Определение эффективности действия дезинфицирующих препаратов.
- •2.5.1. Порядок выполнения работы
- •2.5.2. Определение бактерицидных свойств растворов дезинфицирующих препаратов
- •2.5.3. Определение фенольного коэффициента
- •2.6. Необходимые материалы:
- •2.7. Вопросы для самопроверки:
- •Раздел 3. Санитарно-гигиенический контроль на пищевом предприятии Глава 3.1. Санитарно-микробиологические анализы на пищевом предприятии
- •3.1.1. Смыв с рук
- •Определение общей обсемененности ладони
- •3.1.2. Определение кишечной палочки
- •3.1.3. Определение золотистого стафилококка
- •3.2. Исследование микрофлоры санитарной одежды.
- •3.3. Исследование микрофлоры технологического оборудования
- •3.3.1. Отбор и анализ смывов с тары для мелкой упаковки
- •3.3.2. Смывы с поверхности упаковочного материала
- •3.3.3. При производстве рыбы холодного и горячего копчения тару исследуют
- •3.4. Необходимые материалы
- •3.5. Вопросы для самопроверки.
- •Раздел 4. Микробиология водного сырья
- •4.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора рыбы-сырца
- •4.2. Микрофлора нерыбных объектов морского промысла
- •4.2.1. Микрофлора свежевыловленных беспозвоночных
- •4.3. Микробиологический анализ рыбы-сырца.
- •4.3.1. Определение общей численности бактерий (мафам)
- •4.3.1.1. Определение общей обсемененности рыбы-сырца бактериями чашечным методом (метод предельных разведений, метод Коха)
- •4.3.1.2. Определение общей обсемененности методом микропластинок (метод Фроста)
- •4.3.1.3. Арбитражный метод определения количества аэробных микроорганизмов.
- •4.3.1.4. Определение бактерий р. Salmonella в рыбе и рыбной продукции
- •4.3.1.5. Определение бактерий группы Proteus по методу Шукевича
- •4.3.1.6. Определение коагулазоположительного стафилококка.
- •4.3.1.7. Определение Vibrio parahaemolyticus (галофильный вибрион)
- •4.3.1.8. Выделение Bacillus cereus
- •4.3.1.9. Выделение Listeria monocytogenes
- •4.3.1.10. Выявление дрожжей и плесневых грибов (гост 10444.12-88)
- •4.4. Необходимые материалы
- •4.5. Микробиологические методы исследования беспозвоночных
- •4.5.1. Порядок выполнения работы
- •Порядок выполнения работы
- •4.5.1.1. Определение общей микробной обсемененности
- •4.5.1.2. Прямые методы.
- •4.5.1.2.1. Рост микробов на предметных стеклах с питательным агаром
- •4.5.1.2.2. Определение санитарно-показательных и патогенных организмов
- •4.5.1.2.3. Энтерококки.
- •4.5.1.2.4. Патогенный стафилококк.
- •4.6. Обработка полученных данных
- •4.6.1. Определение процентного соотношения бактериальных форм в посевах с водного сырья.
- •4.6.2. Выделение бактерий в чистую культуру и определение вида бактерии.
- •4.6.3. Идентификация микроорганизмов
- •4.6.4. Определение морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков бактерий
- •4.6.4.1. Культуральные признаки.
- •А. Рост на плотных питательных средах.
- •Б. Рост на жидких питательных средах.
- •4.6.4.2. Морфологические признаки
- •Метод Фонтана
- •Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •4.6.4.3. Определение физиолого-биохимических признаков Отношение к кислороду
- •Отношение к температуре
- •Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
- •Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
- •Д. Выявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
- •Б) Применяемые реактивы.
- •Е. Определение ферментов бактерий. А) Определение липазы
- •Б) Определение каталазы.
- •Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
- •З. Определение интенсивности кислотообразования.
- •И. Выявление аммиака.
- •4.7. Вопросы для самопроверки
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
- •5.1. Краткие теоретические сведения
- •5.2. Определение концентрации антибиотика в продуктах
- •5.2.1. Определение концентрации антибиотика методом бумажных дисков.
- •5.2.2. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом канавки
- •5.2.3. Определение хлортетрациклина в продуктах
- •Построение калибровочной кривой
- •5.3. Необходимое оборудование для одного студента
- •5.4. Вопросы для самопроверки
- •Рекомендуемая литература
- •Содержание:
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •Раздел 2. Дезинфекция и производственная санитария
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
4.3.1.8. Выделение Bacillus cereus
Эта бацилла широко распространена в природе, она встречается в почве, воде, довольно часто обнаруживается в различных пищевых продуктах, особенно в фаршевых изделиях.
Bacillus cereus представляет собой крупные Грамположительные палочки с закругленными концами, подвижна, образует центральные споры, споры не термостойкие. В препаратах бактерия располагается в виде цепочек или штакетообразных скоплений. Бацилла аэробна, расщепляет глюкозу с образованием кислоты без газа; маннит, арабинозу, крахмал и казеин не расщепляет. Способна развиваться в среде с содержанием NaCl до 15 %. Образует лецитиназу, ацетилметилкарбинол.
Выявление Bacillus cereus.
Для выявления Bacillus cereus делают посев 0,1 мл исходного 10%-й взвеси исследуемого материала шпателем Дригальского на поверхность застывшего полимиксинового агара с ТТХ (трифенилтетразолийхлоридом), посев инкубируют при температуре 29º С от 1 до 4 суток. На этой среде Bacillus cereus образует распластанные по поверхности ярко-рубиновые колонии, окруженные широкой зоной белого матового коагулята, образовавшегося вследствие разложения лецитина. Из характерных колоний делают мазки и окрашивают по Граму. При обнаружении характерных бактерий определяют их подвижность, проводят посевы на дифференциально-диагностические среды для определения способности бактерии ферментировать глюкозу и арабинозу, на кровяной агар для выявления способности гемолизировать эритроциты (Bacillus cereus вызывает гемолиз эритроцитов). При совпадении признаков выделенную бактерию считают Bacillus cereus и учитывают численность бактерии в 1 грамме продукта. Если их содержание превышает 105 кл/г, продукт может представлять потенциальную опасность пищевого отравления.
4.3.1.9. Выделение Listeria monocytogenes
Листерии представляют собой короткие Грамположительные палочки, спор не образуют, подвижны при 22º С , неподвижны – при 37º С, каталазоположительные, расщепляют ксилозу, иногда – рамнозу с образованием кислоты без газа. Маннит не ферментируют, капсул не образуют, индол не образуют, желатин и мочевину не расщепляют, аэробы. Развиваются в диапазоне температур от –1,5º до 44º С и в диапазоне рН от 4,4 до 11. Обнаруживается у 37 видов млекопитающих, домашних и диких грызунов, 17 видов птиц, рыб, крабов, моллюсков, мух, клещей, слепней. Выживает и размножается в пресной и морской воде, почве, на рыбном сырье, отходах переработки рыбы, на инвентаре, в полостях, где они образуют микроколонии, покрытые дополнительной оболочкой-биопленкой, поэтому не удаляются при обычной санитарной обработке.
Выделение Listeria monocytogenes . навеску исследуемого материала массой 25 грамм вносят в селективную питательную среду для обогащения: бульон Фрайзера, среду ПБЛ (питательный бульон для листерий). Соотношение продукта и среды 1:9. Посевы термостатируют при 37º С 24 часа. При росте листерии на средах, содержащих эскулин и цитрат железа аммонийного, наблюдается почернение среды. После термостатирования 0,1 мл суспензии пересевают в 10 мл бульона для вторичного обогащения для листерий. Посевы термостатируют 48 часов при температуре 37º С. В средах с эскулином отмечают почернение. Из пробирок после термостатирования независимо от наличия или отсутствия роста делают посев по 0,1 мл на поверхность двух чашек Петри на агар для идентификации листерий (ПАЛКАМ-агар) и среду для определения лецитиназной активности листерий. Посевы термостатируют при температуре 37º С 24-48 часов. На среде Палкам листерии образуют мелкие серовато-зеленые или оливково-зеленые колонии с черным ореолом, иногда с черным центром диаметром от 0,5 до 1 мм. Через 48 часов колонии диаметром 1-2 мм приобретают зеленую окраску с углубленными центрами, окруженными черным ореолом.
Идентификация Listeria monocytogenes. Для определения принадлежности выделенных бактерий к роду Listeria полученные культуры окрашивают по Граму, определяют наличие у них каталазы, способность к ферментации маннита, ставят реакцию нитратредукции.
Обнаружение в посевах грамположительных коротких тонких палочек, каталазоположительных, не восстанавливающих нитраты, не расщепляющих маннит, подвижных при 25 С, и неподвижных при 37 С, указывает на принадлежность выделенных культур к Listeria monocytogenes.
Листерии вызывают у людей три варианта заболеваний: железистую форму, нервную форму и септическую форму. Для возникновения заболевания у чувствительных людей достаточно дозы 100 клеток листерий.