- •Калининград
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Краткие теоретические сведения. Микрофлора воды.
- •Санитарно-показательные организмы
- •1.1. Отбор и транспортировка проб воды в лабораторию.
- •1.2. Санитарно-бактериологические показатели качества воды.
- •Порядок выполнения работы. Определение микробного числа воды.
- •1.3. Определение кишечной палочки в воде. Характеристика кишечной палочки.
- •Определение титра кишечной палочки в воде.
- •1.3.1. Метод мембранных ультрафильтров.
- •1.3.2. Двухэтапный бродильный метод определения коли-титра воды.
- •Нестандартные методы санитарно-микробиологических исследований воды.
- •1.3.3. Трехэтапный бродильный метод
- •1.3.4. Бродильный метод по Звенигородской
- •1.3.5. Метод прямого посева (метод Марманна)
- •1.3.6.Ускоренный метод анализа воды (метод Рублевской водонапорной станции)
- •1.3.7. «Сигнальный» анализ хлорированной воды
- •1.4. Принципы обнаружения в воде патогенных микроорганизмов.
- •1.4.1. Ускоренные методы исследования воды
- •1.5. Необходимые материалы:
- •Способность бактерии расщеплять мочевину.
- •1.6. Контрольные вопросы:
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора воздуха
- •2.2. Отбор проб воздуха
- •2.3. Исследование воздуха на санитарно-показательную микрофлору
- •2.4. Порядок выполнения работы
- •2.4.1. Определение микробного числа методом Коха.
- •2.4.2. Исследование микрофлоры воздуха с помощью прибора Кротова
- •2.4.3. Необходимые материалы
- •2.4.4. Контрольные вопросы
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •3.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора почвы и ее самоочищение
- •3.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •3.2.1. Порядок выполнения работы
- •Подготовка образца почвы для анализа
- •3.2.2. Определение микробного числа почвы
- •3.2.3. Определение титра кишечной палочки почвы
- •3.3. Ускоренный метод исследования кишечной палочки в почве
- •3.3.1. Бродильный метод с использованием ттх
- •3.3.2. Метод мембранных фильтров
- •3.4. Полный санитарно - микробиологический анализ почвы
- •3.4.1. Определение титра Cl. Perfringens
- •3.4.2. Обнаружение в почве протеев
- •3.4.3. Определение e. Coli методом прямого посева.
- •3.4.4. Определение термофильных бактерий
- •3.4.5. Исследование почвы на наличие Cl. Tetani (возбудитель столбняка)
- •3.4.6. Исследование почвы на наличие Cl. Botulinum
- •3.5. Оценка санитарно-микробиологического состояния почвы
- •3.6. Необходимые материалы
- •3.7. Вопросы для самоконтроля
- •Раздел 2 дезинфекция и производственная санитария
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Дезинфекция и производственная санитария
- •2.2. Факторы, влияющие на эффективность мойки и дезинфекции
- •2.2.1. Степень загрязненности
- •2.2.2. Концентрация дезинфицирующего раствора и режим дезинфекции
- •2.2.3. Режим ополаскивания
- •2.2.4. Режим течения моющих растворов
- •2.2.5. Концентрация и температура моющего раствора
- •2.3. Свойства моющих препаратов
- •2.3.1. Моющие препараты
- •2.3.1.1. Щелочные моющие препараты
- •2.3.1.2.Синтетические моющие препараты
- •2.4. Дезинфицирующие вещества
- •2.4.1. Хлорсодержащие дезинфектанты
- •2.4.2. Универсальные препараты
- •2.5. Определение эффективности действия дезинфицирующих препаратов.
- •2.5.1. Порядок выполнения работы
- •2.5.2. Определение бактерицидных свойств растворов дезинфицирующих препаратов
- •2.5.3. Определение фенольного коэффициента
- •2.6. Необходимые материалы:
- •2.7. Вопросы для самопроверки:
- •Раздел 3. Санитарно-гигиенический контроль на пищевом предприятии Глава 3.1. Санитарно-микробиологические анализы на пищевом предприятии
- •3.1.1. Смыв с рук
- •Определение общей обсемененности ладони
- •3.1.2. Определение кишечной палочки
- •3.1.3. Определение золотистого стафилококка
- •3.2. Исследование микрофлоры санитарной одежды.
- •3.3. Исследование микрофлоры технологического оборудования
- •3.3.1. Отбор и анализ смывов с тары для мелкой упаковки
- •3.3.2. Смывы с поверхности упаковочного материала
- •3.3.3. При производстве рыбы холодного и горячего копчения тару исследуют
- •3.4. Необходимые материалы
- •3.5. Вопросы для самопроверки.
- •Раздел 4. Микробиология водного сырья
- •4.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора рыбы-сырца
- •4.2. Микрофлора нерыбных объектов морского промысла
- •4.2.1. Микрофлора свежевыловленных беспозвоночных
- •4.3. Микробиологический анализ рыбы-сырца.
- •4.3.1. Определение общей численности бактерий (мафам)
- •4.3.1.1. Определение общей обсемененности рыбы-сырца бактериями чашечным методом (метод предельных разведений, метод Коха)
- •4.3.1.2. Определение общей обсемененности методом микропластинок (метод Фроста)
- •4.3.1.3. Арбитражный метод определения количества аэробных микроорганизмов.
- •4.3.1.4. Определение бактерий р. Salmonella в рыбе и рыбной продукции
- •4.3.1.5. Определение бактерий группы Proteus по методу Шукевича
- •4.3.1.6. Определение коагулазоположительного стафилококка.
- •4.3.1.7. Определение Vibrio parahaemolyticus (галофильный вибрион)
- •4.3.1.8. Выделение Bacillus cereus
- •4.3.1.9. Выделение Listeria monocytogenes
- •4.3.1.10. Выявление дрожжей и плесневых грибов (гост 10444.12-88)
- •4.4. Необходимые материалы
- •4.5. Микробиологические методы исследования беспозвоночных
- •4.5.1. Порядок выполнения работы
- •Порядок выполнения работы
- •4.5.1.1. Определение общей микробной обсемененности
- •4.5.1.2. Прямые методы.
- •4.5.1.2.1. Рост микробов на предметных стеклах с питательным агаром
- •4.5.1.2.2. Определение санитарно-показательных и патогенных организмов
- •4.5.1.2.3. Энтерококки.
- •4.5.1.2.4. Патогенный стафилококк.
- •4.6. Обработка полученных данных
- •4.6.1. Определение процентного соотношения бактериальных форм в посевах с водного сырья.
- •4.6.2. Выделение бактерий в чистую культуру и определение вида бактерии.
- •4.6.3. Идентификация микроорганизмов
- •4.6.4. Определение морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков бактерий
- •4.6.4.1. Культуральные признаки.
- •А. Рост на плотных питательных средах.
- •Б. Рост на жидких питательных средах.
- •4.6.4.2. Морфологические признаки
- •Метод Фонтана
- •Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •4.6.4.3. Определение физиолого-биохимических признаков Отношение к кислороду
- •Отношение к температуре
- •Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
- •Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
- •Д. Выявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
- •Б) Применяемые реактивы.
- •Е. Определение ферментов бактерий. А) Определение липазы
- •Б) Определение каталазы.
- •Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
- •З. Определение интенсивности кислотообразования.
- •И. Выявление аммиака.
- •4.7. Вопросы для самопроверки
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
- •5.1. Краткие теоретические сведения
- •5.2. Определение концентрации антибиотика в продуктах
- •5.2.1. Определение концентрации антибиотика методом бумажных дисков.
- •5.2.2. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом канавки
- •5.2.3. Определение хлортетрациклина в продуктах
- •Построение калибровочной кривой
- •5.3. Необходимое оборудование для одного студента
- •5.4. Вопросы для самопроверки
- •Рекомендуемая литература
- •Содержание:
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •Раздел 2. Дезинфекция и производственная санитария
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
3.2.3. Определение титра кишечной палочки почвы
Титр кишечной палочки почвы – это наименьшая масса почвы, выраженная в граммах, в которой обнаружена одна кишечная палочка. Коли–индекс почвы – количество кишечных палочек в 1 г почвы. При санитарной оценке почвы учитывают все разновидности кишечной палочки, вызывающие газообразование на жидких средах с глюкозой при 43-450 С.
Для определения кишечной палочки применяют трехэтапный бродильный метод. Питательные среды, употребляемые при аналогичном исследовании воды, в данном случае малопригодны, т.к. разнообразные микроорганизмы почвы, развиваясь на этих средах, могут подавить рост кишечной палочки или вызвать газообразование независимо от ее присутствия. Поэтому для засева почвы применяют среды, содержащие генцианвиолет или другие антисептические вещества, подавляющие развитие Грампозитивных бактерий, но не препятствующие росту кишечной палочки. Наиболее пригодна для этих целей среда Кесслера - Свенартона, содержащая генцианвиолет. При анализе чистых почв в бродильные сосуды засевают 1,0, 0,1, 0,01, 0,001 г, загрязненных – 0,001,0,0001, 0,00001, 0,…..1 г. Использование пипеток такое же как и при определении микробного числа почвы. Посевы инкубируют при 430 С 48 часов.
Для выявления кишечной палочка в почве можно использовать среду с ТТХ (2-, 3-, 5-трифенил-тетразолий-хлорид). Эта среда по чувствительности не уступает среде Кесслера-Свенартона и на сутки сокращает срок исследования первой бродильной пробы.
3.3. Ускоренный метод исследования кишечной палочки в почве
3.3.1. Бродильный метод с использованием ттх
Метод основан на способности бактерий группы кишечной палочки восстанавливать бесцветный ТТХ в устойчивое соединение трифенилформазин. Он плохо растворим в воде и выпадает в виде красно-коричневого осадка. Кишечная палочка довольно устойчива к действию формазина, в тоже время формазин тормозит развитие сопутствующей микрофлоры. Анализ выполняется по схеме трехэтапного бродильного метода. Инкубирование первой бродильной пробы проводится не 48 часов, а только 24.
3.3.2. Метод мембранных фильтров
Подготовка почвенной суспензии, фильтрация через мембранные фильтры № 3, перенос фильтров на среду Эндо ничем не отличаются от таковых при исследовании воды.
Определение коли-титра в 0,1 г почвы и более связано с некоторыми трудностями, т.к. на фильтре откладывается большое количество взвешенных частиц, затрудняющих рост кишечной палочки. В связи с этим рекомендуется на мембранный фильтр №3 накладывать стерильный планктонный фильтр и фильтровать требуемую взвесь почвы через оба фильтра, затем оба фильтра переносят на среду Эндо и проращивают при температуре 43-450 С. Дальнейший ход анализа и оценка его результатов проводятся также, как и при анализе воды.
3.4. Полный санитарно - микробиологический анализ почвы
К выше описанным анализам при выполнении полного анализа почвы добавляются следующие: определение титра Cl. perfringens, Pr. vulgaris, термофильных микроорганизмов, Cl. tetani, Cl. botulinum.
3.4.1. Определение титра Cl. Perfringens
Cl. perfringens представляет собой палочку с закругленными концами, она неподвижна, в организме человека образует капсулу, образует спору, которая больше поперечника палочки, сдвинута к одному из концов. Молодые клетки красятся по Граму положительно, старые – отрицательно. Бактерия медленно расщепляет желатин, восстанавливает нитраты в нитриты, образует Н2S, не образует индола, образует ацетилметилкарбинол, свертывает молоко. Cl. perfringens сбраживает с образованием кислоты и газа глюкозу, сахарозу, галактозу, мальтозу, глицерин, не сбраживает маннит, дульцит.
Образует токсины некротического и летального действия, гемотоксин, нейротоксин, а также ферменты лецитиназу, гиалуронидазу, фибринолизин, протеиназу, поэтому под действием этой бактерии быстро происходит распад мышечной ткани.
На питательной среде Китта-Тароцци образует равномерное помутнение и много газа, в анаэробных условиях образует дисковидные колонии.
Cl. perfringens возбуждает пищевые отравления, некротический энтерит, выделяется при заболевании газовой гангреной.
Температурный оптимум развития 370 С, рН 6,0-3,0
Для определения титра Cl. perfringens используют два метода – посев в железо-сульфитный агар (среда Вильсон-Блера) и посев в обезжиренное молоко.
I метод. Обнаружение Cl. perfringens на железо-сульфитном агаре основано на способности этого микроба восстанавливать Na2S2O3 до сульфида натрия Na2S, который, взаимодействуя с хлорным железом, приводит к образованию сульфидного железа FeS, имеющее черный цвет.
Ход исследования.
Готовят почвенную взвесь, можно использовать разведения для определения коли-титра. Пробирки с разведениями переносят на водяную баню и прогревают 15 мин при 800С.
Стерильной пипеткой берут 1 мл соответствующего разведения и переносят в пробирку с расплавленной и охлажденной до 450С средой Вильсон-Блера. Вращением пробирки в руках почвенную суспензию равномерно распределяют в среде. Посевы выращивают 12-18 часов при430С. О росте бактерий судят по появлению черных колоний и иногда разрыве среды в первые 18 часов. В более поздние сроки такую картину могут давать и другие анаэробы. В мазке обнаруживается характерная микрофлора.
II метод. Этот метод основан на способности Cl. perfringens развиваться в молоке и вызывать в нем специфические изменения с образованием губчатого сгустка на поверхности, отделения сыворотки и образования большого количества газа.
Ход исследования.
Подготовленные разведения почвенной суспензии по 1 мл вносят в пробирки с 5 мл молочной среды Тукаева, инкубируют 12-20 часов при температуре 430С, при наличии специфического изменения молока (см. выше), делают мазки и окрашивают по Граму. В положительным случаях обнаруживают Грамположительные крупные, толстые палочки с центрально или субтерминально расположенными спорами.
Для выявления Cl. perfringens можно использовать сульфит-полимиксин-неоми-циновую среду. Термостатирование посева проводится 10-12 часов при температуре 44-450С, при наличии бактерии образуются черные колонии, дальнейшего анализа не требуется.
Можно использовать также среды Китта-Тароцци, Клодницкого, бульон Мартена с ватными поплавками. Для высева используют прогретые и нативные разведения по 1 мл в жидкую или полужидкую среду. Посевы термостатируют 18-20 час при температуре 370С.