3.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы

Цель работы – знакомство с методиками исследования микрофлоры почвы.

3.2.1. Порядок выполнения работы

Санитарно-микробиологическое исследование почвы включает определение титра санитарно-показательных микроорганизмов E. coli , Cl. perfringens, определение микробного числа почвы и поиск патогенных микроорганизмов.

В некоторых случаях проводится краткий анализ почвы, который включает определение микробного числа почвы и санитарно-показательных микроорганизмов. В полный анализ почвы дополнительно включают определение протея, обнаружение тифопаратифозных и дизентерийных возбудителей и поиски возбудителей раневых инфекций, термофильных анаэробов.

С выделенного участка почвы отбирают среднюю пробу, составленную из 5 образцов, взятых по диагонали участка или в четырех точках по краям и в одной в центре.

При проведении микробиологических исследований поверхностных слоев почвы образцы берут стерильным инструментом на глубине до 20 см. В тех случаях, когда желают изучить влияние загрязнений на санитарное состояние грунтовых вод и открытых водоемов, – на глубине 0,75 - 2 м.

Пробы отбирают в широкогорлые стерильные банки, каждый образец должен иметь массу 200 - 300 г, а смешанный образец не менее 1 кг.

Для установления эффективности обезвреживания нечистот и хозяйственно-бытовых отбросов образцы почвы следует отбирать на глубине 25 - 150 см, а при исследовании почвы кладбищ и скотомогильников – не менее чем на 25 см ниже глубины захоронения. Отбор проб почвы глубоких слоев производят буром Некрасова. Перед взятием нового образца почвы инструмент следует обмыть, обтереть спиртом и обжечь.

Отобранные пробы лучше исследовать в тот же день. Допускается хранение образцов почвы при температуре 1 - 5º не более 12 - 18 часов.

Подготовка образца почвы для анализа

Образцы почвы освобождают от крупных включений, размельчают, просевают через стерильное 3-мм сито, затем пробу почвы тщательно перемешивают и отбирают 30 г и помещают в колбу емкостью 500мл с 270 мл стерильной воды. Колбу встряхивают 10 мин и из полученной суспензии без отстаивания приготовляют разведения: для чистой почвы 3-4 разведения, для загрязненной – 4-6 .

3.2.2. Определение микробного числа почвы

Микробное число почвы – это количество мезофильных аэробных и ф/анаэробных сапрофитных микроорганизмов, находящихся в 1 г почвы.

Для определения микробного числа почвы в санитарной микробиологии используют метод предельных разведений, предложенный Р. Кохом. Из каждой пробы почвы должно использоваться не менее 2-х различных разведений. Разведение готовят, отмывая микробы от частичек почвы в стерильной воде. При исследовании чистых почв засевают разведение 1:10³ и 1:10⁴, грязных почв 1:10⁵ и 1:10⁶. Для переноса суспензии каждого разведения в чашку Петри используют свежую стерильную пипетку. Допускается одной и той же пипеткой делать несколько посевов, но в этом случае посев следует начинать с большего разведения и переходить к меньшему (1:10⁴ , 1:10³ , 1:10²). В стерильную чашку Петри, слегка приоткрыв крышку, вносят 1 мл почвенной суспензии соответствующего разведения. Затем в эту чашку в стерильных условиях вносят 15 мл остуженного до 45⁰ С МПА или РПА, хорошо перемешивают круговыми движениями, закрытую чашку оставляют на горизонтальной плоскости для застывания агара.

При учете результатов число колоний. выросших на чашке, умножают на соответствующее разведение, объем пробы и пересчитывают на 1 г почвы. Чашки, на которых выросло мало колоний, во внимание не принимаются, так как случайное загрязнение их даже единичными микробами может дать существенную ошибку при последующих расчетах. Если выросло слишком большое количество колоний, то их не подсчитывают. В этих случаях повторяют исследование, сделав соответствующие поправки при посевах.