- •Калининград
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Краткие теоретические сведения. Микрофлора воды.
- •Санитарно-показательные организмы
- •1.1. Отбор и транспортировка проб воды в лабораторию.
- •1.2. Санитарно-бактериологические показатели качества воды.
- •Порядок выполнения работы. Определение микробного числа воды.
- •1.3. Определение кишечной палочки в воде. Характеристика кишечной палочки.
- •Определение титра кишечной палочки в воде.
- •1.3.1. Метод мембранных ультрафильтров.
- •1.3.2. Двухэтапный бродильный метод определения коли-титра воды.
- •Нестандартные методы санитарно-микробиологических исследований воды.
- •1.3.3. Трехэтапный бродильный метод
- •1.3.4. Бродильный метод по Звенигородской
- •1.3.5. Метод прямого посева (метод Марманна)
- •1.3.6.Ускоренный метод анализа воды (метод Рублевской водонапорной станции)
- •1.3.7. «Сигнальный» анализ хлорированной воды
- •1.4. Принципы обнаружения в воде патогенных микроорганизмов.
- •1.4.1. Ускоренные методы исследования воды
- •1.5. Необходимые материалы:
- •Способность бактерии расщеплять мочевину.
- •1.6. Контрольные вопросы:
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора воздуха
- •2.2. Отбор проб воздуха
- •2.3. Исследование воздуха на санитарно-показательную микрофлору
- •2.4. Порядок выполнения работы
- •2.4.1. Определение микробного числа методом Коха.
- •2.4.2. Исследование микрофлоры воздуха с помощью прибора Кротова
- •2.4.3. Необходимые материалы
- •2.4.4. Контрольные вопросы
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •3.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора почвы и ее самоочищение
- •3.2. Санитарно-микробиологическое исследование почвы
- •3.2.1. Порядок выполнения работы
- •Подготовка образца почвы для анализа
- •3.2.2. Определение микробного числа почвы
- •3.2.3. Определение титра кишечной палочки почвы
- •3.3. Ускоренный метод исследования кишечной палочки в почве
- •3.3.1. Бродильный метод с использованием ттх
- •3.3.2. Метод мембранных фильтров
- •3.4. Полный санитарно - микробиологический анализ почвы
- •3.4.1. Определение титра Cl. Perfringens
- •3.4.2. Обнаружение в почве протеев
- •3.4.3. Определение e. Coli методом прямого посева.
- •3.4.4. Определение термофильных бактерий
- •3.4.5. Исследование почвы на наличие Cl. Tetani (возбудитель столбняка)
- •3.4.6. Исследование почвы на наличие Cl. Botulinum
- •3.5. Оценка санитарно-микробиологического состояния почвы
- •3.6. Необходимые материалы
- •3.7. Вопросы для самоконтроля
- •Раздел 2 дезинфекция и производственная санитария
- •2.1. Краткие теоретические сведения. Дезинфекция и производственная санитария
- •2.2. Факторы, влияющие на эффективность мойки и дезинфекции
- •2.2.1. Степень загрязненности
- •2.2.2. Концентрация дезинфицирующего раствора и режим дезинфекции
- •2.2.3. Режим ополаскивания
- •2.2.4. Режим течения моющих растворов
- •2.2.5. Концентрация и температура моющего раствора
- •2.3. Свойства моющих препаратов
- •2.3.1. Моющие препараты
- •2.3.1.1. Щелочные моющие препараты
- •2.3.1.2.Синтетические моющие препараты
- •2.4. Дезинфицирующие вещества
- •2.4.1. Хлорсодержащие дезинфектанты
- •2.4.2. Универсальные препараты
- •2.5. Определение эффективности действия дезинфицирующих препаратов.
- •2.5.1. Порядок выполнения работы
- •2.5.2. Определение бактерицидных свойств растворов дезинфицирующих препаратов
- •2.5.3. Определение фенольного коэффициента
- •2.6. Необходимые материалы:
- •2.7. Вопросы для самопроверки:
- •Раздел 3. Санитарно-гигиенический контроль на пищевом предприятии Глава 3.1. Санитарно-микробиологические анализы на пищевом предприятии
- •3.1.1. Смыв с рук
- •Определение общей обсемененности ладони
- •3.1.2. Определение кишечной палочки
- •3.1.3. Определение золотистого стафилококка
- •3.2. Исследование микрофлоры санитарной одежды.
- •3.3. Исследование микрофлоры технологического оборудования
- •3.3.1. Отбор и анализ смывов с тары для мелкой упаковки
- •3.3.2. Смывы с поверхности упаковочного материала
- •3.3.3. При производстве рыбы холодного и горячего копчения тару исследуют
- •3.4. Необходимые материалы
- •3.5. Вопросы для самопроверки.
- •Раздел 4. Микробиология водного сырья
- •4.1. Краткие теоретические сведения. Микрофлора рыбы-сырца
- •4.2. Микрофлора нерыбных объектов морского промысла
- •4.2.1. Микрофлора свежевыловленных беспозвоночных
- •4.3. Микробиологический анализ рыбы-сырца.
- •4.3.1. Определение общей численности бактерий (мафам)
- •4.3.1.1. Определение общей обсемененности рыбы-сырца бактериями чашечным методом (метод предельных разведений, метод Коха)
- •4.3.1.2. Определение общей обсемененности методом микропластинок (метод Фроста)
- •4.3.1.3. Арбитражный метод определения количества аэробных микроорганизмов.
- •4.3.1.4. Определение бактерий р. Salmonella в рыбе и рыбной продукции
- •4.3.1.5. Определение бактерий группы Proteus по методу Шукевича
- •4.3.1.6. Определение коагулазоположительного стафилококка.
- •4.3.1.7. Определение Vibrio parahaemolyticus (галофильный вибрион)
- •4.3.1.8. Выделение Bacillus cereus
- •4.3.1.9. Выделение Listeria monocytogenes
- •4.3.1.10. Выявление дрожжей и плесневых грибов (гост 10444.12-88)
- •4.4. Необходимые материалы
- •4.5. Микробиологические методы исследования беспозвоночных
- •4.5.1. Порядок выполнения работы
- •Порядок выполнения работы
- •4.5.1.1. Определение общей микробной обсемененности
- •4.5.1.2. Прямые методы.
- •4.5.1.2.1. Рост микробов на предметных стеклах с питательным агаром
- •4.5.1.2.2. Определение санитарно-показательных и патогенных организмов
- •4.5.1.2.3. Энтерококки.
- •4.5.1.2.4. Патогенный стафилококк.
- •4.6. Обработка полученных данных
- •4.6.1. Определение процентного соотношения бактериальных форм в посевах с водного сырья.
- •4.6.2. Выделение бактерий в чистую культуру и определение вида бактерии.
- •4.6.3. Идентификация микроорганизмов
- •4.6.4. Определение морфологических, культуральных и физиолого-биохимических признаков бактерий
- •4.6.4.1. Культуральные признаки.
- •А. Рост на плотных питательных средах.
- •Б. Рост на жидких питательных средах.
- •4.6.4.2. Морфологические признаки
- •Метод Фонтана
- •Метод серебрения жгутиков по Морозову
- •4.6.4.3. Определение физиолого-биохимических признаков Отношение к кислороду
- •Отношение к температуре
- •Тест на окисление-брожение, или тест Хью-Лейфсона
- •Отношение к углеводам и пятиатомным спиртам
- •Д. Выявление индола и применяемые реактивы. А) Методы выявления
- •Б) Применяемые реактивы.
- •Е. Определение ферментов бактерий. А) Определение липазы
- •Б) Определение каталазы.
- •Ж. Выявление способности бактерий восстанавливать нитраты в нитриты.
- •З. Определение интенсивности кислотообразования.
- •И. Выявление аммиака.
- •4.7. Вопросы для самопроверки
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
- •5.1. Краткие теоретические сведения
- •5.2. Определение концентрации антибиотика в продуктах
- •5.2.1. Определение концентрации антибиотика методом бумажных дисков.
- •5.2.2. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом канавки
- •5.2.3. Определение хлортетрациклина в продуктах
- •Построение калибровочной кривой
- •5.3. Необходимое оборудование для одного студента
- •5.4. Вопросы для самопроверки
- •Рекомендуемая литература
- •Содержание:
- •Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
- •Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
- •Глава 2. Санитарно-бактериологический анализ воздуха
- •Глава 3. Санитарная микробиология почвы
- •Раздел 2. Дезинфекция и производственная санитария
- •Раздел 5. Использование антибиотиков в рыбной промышленности
Кузьмина С.А.
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ВЫПОЛНЕНИЮЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ ПО ДИСЦИПЛИНЕ «МИКРОБИОЛОГИЯ ВОДНОГО СЫРЬЯ» для студентов специальностей
260100.62, 260100.68, 260302.65.
Калининград
2006
Методические указания предназначены для студентов, изучающих специальный курс микробиологического цикла «Микробиология водного сырья», который изучают после курса «Микробиология», поэтому в «Методических указаниях» отсутствуют первоначальные сведения о морфологии микроорганизмов, знакомство с бродильными процессами, возбуждаемыми микробами, которые изучаются ранее. В указаниях приводятся углубленные сведения о санитарии окружающей среды (воды, воздуха, почвы), различные методики исследования микрофлоры водного сырья, выделения бактерий в чистую культуру и определения их вида, а также сведения о методах определения чувствительности бактерий к различным антибиотикам, концентрации антибиотика в растворе. В методических указаниях приводятся методики определения эффективности дезинфицирующих средств, используемых в пищевой промышленности, на бактериофлору.
Раздел 1. Санитарно-микробиологический анализ воды, воздуха, почвы.
Глава 1. Исследование микрофлоры воды.
Цель работы –усвоение методик анализа микрофлоры воды (определение микробного числа воды, титра кишечной палочки воды).
Необходимое оборудование, реактивы. Стерильные флаконы на 250, 50, 10 мл с ГПС, закрытые ватно-марлевыми пробками, чашки Петри стерильные, чашки Петри со средой Эндо, стерильные пипетки на 1 и 10 мл, стерильные цилиндры на 200 мл, микроскоп, предметные стекла, реактивы для окраски по Граму, реактивы для определения оксидазной и лактозной активности. Пробирки с полужидкими питательными средами Гисса с сахарозой и глюкозой (лактозой, маннитом) и индикатором, РПА столбиком.
Краткие теоретические сведения. Микрофлора воды.
Численность и видовой состав микрофлоры воды зависит от физико-химических условий воды, а также от влияния биогенных факторов.
В воде находятся в растворенном состоянии газы, органические и минеральные соединения, а также всевозможные взвеси – сестон. Сестон состоит как из мертвых частиц растительного и животного происхождения – абиосестон, так и живых организмов – биосестон. Существенным элементом сестона, оказывающим влияние на протекающие в воде процессы, является микробная составляющая – микробный планктон.
К группе автохтонных (местных) микробов, способных выживать и длительно размножаться в воде, относятся пигментные кокки, бактерии р.р. Pseudomonas, Achromobacter, в основном в воде встречаются те бактерии, которые обитают в почве вокруг водоема.
Численность бактерий в 1 мл воды достаточно велика, особенно много бактерий в морской воде, до 106 кл/мл, наибольшее количество бактерий обнаруживается в воде прибрежной зоны. В морской воде часто встречаются светящиеся бактерии р. Photobacterium. С увеличением глубины численность бактерий в воде падает: на глубине 1 км встречаются единичные клетки, а на глубине 4 км и более бактерии практически отсутствуют.
В иле водоемов встречаются сульфатредукторы, нитрификаторы, серобактерии, азотфиксаторы, бактерии, расщепляющие клетчатку, аммонифицирующие формы и др. Численность бактерий составляет до 108 кл/г и более.
Подземные воды, фильтруясь через толстый слой почвы, очищаются от микробов, особенно чистой считается родниковая и артезианская вода. Эти воды содержат единичные клетки сапрофитов, но эта вода может сильно загрязняться через трещины в почве, по которым в неё могут попадать загрязненные стоки. Легко загрязняются неглубокие колодцы, благодаря просачиванию через срубы фекально-мочевых нечистот из рядом расположенных выгребных ям. Открытые водоемы в районе крупных населенных пунктов часто являются приемниками стоков нечистот, дождевых, талых и бытовых стоков, местом купания. В эти водоемы попадает патогенная микрофлора – холерные вибрионы, возбудители тифа, паратифа, сальмонеллезов, бактерии дизентерии, сибирской язвы, бруцеллеза, сапа, лептоспироза и др., энтеропатогенные вирусы и др.
В последнее время увеличилась загрязненность рек, озер, колодцев бактериями р. Yersinia. Иерсинии вызывают у человека кишечные иерсиниозы, протекающие по типу гастроэнтеритов и энтероколитов. Бактерии из этого же рода возбуждают псевдотуберкулез – дальневосточную скарлатиноподобную лихорадку. Особенность этих бактерий заключается в том, что они, являясь психрофилами, способны жить и размножаться при низкой температуре 10-20 С и сохраняться в подземных и грунтовых водах. Загрязнение водоемов иерсиниями происходит при биологической контаминации от теплокровных животных и рыб, которые являются носителями иерсиний.