VIII. Задания, обязательные для выполнения

Составить схему исследования по направлению:

1. Провести судебно-химическое исследование при подозрении на отрав­ ление производными барбитуровой кислоты.

2. Провести судебно-химическое исследование при подозрении на отрав­ ление производными пиразолона-5.

3. Заполнить таблицу:

МКС-реакции		производных		барбитуровой		кислоты
Производные				Реактивы
барбитуровой		1
кислоты		Фо		эма кристаллов
1.							1 1
2.
3.
4.				1

IX. План работы на занятиях

Работа на занятии 1 состоит из этапов:

• обсуждение вопросов токсичности и метаболизма производных барби­туровой кислоты;

• обсуждение методик предварительного и подтверждающего исследова-

ния на производные барбитуровой кислоты химическими методами;

• проведение цветных и МКС реакций на производные барбитуровой ки-

слоты. Работа на занятии 2 состоит из этапов:

• обсуждение методик и проведение определения количественного со­держания производных барбитуровой кислоты в изоляте спектрофото-метрическим методом;

• тестовый контроль по вопросам предварительного исследования ве-

ществ кислого характера. Работа на занятии 3 состоит из этапов:

• рассмотрение вопросов токсичности и метаболизма производных пира-золона-5;

• практическая работа по обнаружению производных пиразолона-5;

« тестовый контроль по вопросам предварительного исследования ве­ществ основного характера.

X. Лабораторная работа

Обнаружение производных барбитуровой кислоты Предварительные исследования

1. Реакция с нитратом кобальта.

Бумагу, импрегнированную раствором нитрата кобальта, смачивают ис­следуемым экстрактом, содержащим производное барбитуровой кислоты, под­сушивают, держат над парами аммиака. Бумага окрашивается в розово-фиолетовый цвет.

2. ТСХ-скрининг.

Система растворителей: хлороформ-ацетон (9:1). Способы детекции:

• 5% раствором сульфата ртути;

• раствором 0,01% дифенилкарбазона в хлороформе.

Подтверждающие исследования

1. Мурексидная проба.

В фарфоровую чашку к сухому остатку, полученному после выпаривания хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта при комнатной температуре, прибавляют 3 капли 3% раствора перекиси водорода и 3 капли ре­актива, содержащего соль Мора и хлорид аммония. Содержимое чашки выпа­ривают на электроплитке и сухой остаток нагревают до появления белых паров. После охлаждения прибавляют 3 капли б н. раствора гидроксида аммония. При наличии производных барбитуровой и тиобарбитуровой кислот появляется ро­зовая окраска.

Следует обратить внимание, что кофеин даёт подобную реакцию. *

2. Реакция с концентрированной серной кислотой (МКС).

На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в капле концентрированной серной кислоты, помещенной на пред­метное стекло. Через 3-5 мин рядом помещают каплю дистиллированной воды и капилляром соединяют их. Через 10-20 мин под микроскопом наблюдают по­явление кристаллов кислотной формы.

(^ЗуРеакция с хлорцинкйодом (МКС).

На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю раствора хлорцинкйода. Через 10-15 мин под микроско­пом наблюдают форму образовавшихся кристаллов.

2?)Реакпия со смесью хлорида железа и йодида калия (МКС).

На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю раствора железойоидного реактива (смесь хлорида железа и йодида калия). Через 10-15 мин под микроскопом наблюдают форму образо­вавшихся кристаллов.

5. Реакция с дииодокупратом калия в растворе йода (МКС).

На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 1 каплю дииодокупрата калия в растворе йода. Через 10-15 минут под микроскопом наблюдают форму образовавшихся кристаллов.

6. Поглощение в УФ-области.

Кюветы спектрофотометра заполняют раствором барбитурата (рН=Ю) и буферным раствором (рН=10), снимают спектр поглощения. Максимум погло­щения наблюдают в интервале длин волн 235-245 им.

В кюветы спектрофотометра с раствором барбитурата (рН=10) и буфер­ным раствором (рН=10) добавляют по 1-2 капли концентрированной соляной кислоты до рН=2, перемешивают стеклянной палочкой и снимают спектр по­глощения, Наблюдают плавное снижение оптической плотности в интервале длин волн 220-260 нм.

В кюветы спектрофотометра с раствором барбитурата (рН=10) и буфер­ным раствором (рН=10) добавляют по 1-2 капли концентрированного (4 н.) рас­твора натрия гидроксида до рН=13, перемешивают стеклянной палочкой и сни­мают спектр поглощения. Максимум поглощения наблюдают в интервале длин волн 255-265 нм.

Обнаружение производных пиразолона-5 Предварительные исследования

1. Реакция с хлоридом железа.

На предметное стекло наносят несколько капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта и выпаривают досуха, к сухому остатку прибавляют каплю 1% раствора хлорида железа. При наличии амидопирина по­является фиолетовая окраска, исчезающая от избытка реактива; антипирина -оранжево-красная; анальгина— синяя.

2. ТСХ-скрининг. Система растворителей:

хлороформ-ацетон (9:1), при исследовании экстракта из кислой среды.

Способы детекции:

• 5% раствором хлорида железа,

• реактивом Драгендорфа.

Подтверждающие исследования

1. Реакция с нитратом серебра.

В пробирку или выпарительную чашку вносят 3-5 капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют каплю воды и 1-2 капли реактива и нагревают на водяной бане в течение 3-5 мин. Появляется фиолетовая (амидопирин) или сине-зелёная (анальгин) окраска раствора.

2. Реакция с нитритом натрия.

В пробирку или выпарительную чашку вносят 3-5 капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют каплю воды и каплю 10% раствора нитрита натрия. Появ­ляется фиолетовое окрашивание, быстро исчезающее при добавлении избытка реактива (амидопирин) или устойчивая зелёная окраска (антипирин). Анальгин с 1% раствором нитрита натрия даёт синее окрашивание.

3. Реакция с серной и фуксинсернистой кислотами.

В пробирку или выпарительную чашку вносят 3-5 капель хлороформного раствора исследуемого вещества или экстракта, выпаривают досуха. К сухому остатку прибавляют по капле воды, концентрированной серной и хромотропо-вой кислот. При наличии амидопирина наблюдается красное окрашивание, анальгина - красно-фиолетовое.

4. Лигниновая проба.

Хлороформный раствор исследуемого вещества или экстракт наносят на газетную бумагу в присутствии соляной кислоты. Наблюдают жёлто-оранжевое окрашивание при наличии анальгина.