Министерство общего и профессионального образования РФ Нижегородский Государственный Технический Университет

Дзержинский филиал

Кафедра «Процессы и аппараты химической и пищевой технологии»

Лабораторная работа №2 «Методы стерилизации»

Разработал: Перетрутов А.А

Дзержинск, 2000 г.

1. Цель работы

Целью данной работы является изучение методов стерилизации оборудования и материалов, применяемых в микробиологических лабораториях. В ходе лабораторной работы приобретаются навыки уничтожения всей микрофлоры, навыки работы с аппаратурой, приборами и материалами.

2.Краткие сведения из теории и практики стерилизации

Стерилизация должна обеспечивать' уничтожение всей микрофлоры, патогенной и непатогенной, на данном объекте. Полное обеспложивание питательных сред, бактериологической посуды — это необходимое условие для получения чистых культур микроорганизмов.

Многие лекарственные и биологические препараты (вакцина, сыворотки), а также диагностические (туберкулин, маллеин и др.) используют в стерильном виде. Широкое применение стерилизация нашла в пищевой промышленности, особенно в консервной.

Стерилизация не должна приводить к порче материала или изменению его физических свойств или химического состава. В зависимости от физических свойств стерилизуемых предметов и цели стерилизации применяют разные методы беспложивания: горячий (влажная, дробная, сухая стерилизация) и холодный механическая стерилизация, ионизация, стерилизация ультразвуком). Основное значение имеет тепловое воздействие на объект.

2.1. Влажная стерилизация.

Стерилизовать кипячением можно металлические инструменты, шприцы, иглы, этой целью используют стерилизаторы, нагреваемые на пламени горелки или с помощью электронагревательных приборов. В стерилизатор наливают дистилированную воду, лучше с добавлением 1 % пищевой соды. Продолжительность кипячения -10...30 мин. Шприцы помещают в холодную воду в разобраном виде, цилиндр и поршень обертывают отдельно марлей. Металлические предметы опускают, чтобы они не покрылись ржавчиной, в кипящую воду, режущие части во избежание затупления обертывают ватой. Кипячение убивает вегетативные формы бактерий и споры некоторых бацилл например, Вас. anthracis и др.).

Однако, даже продолжительное кипячение не обеспечивает гибели спор которых анаэробных бацилл, выдерживающих кипячение более 3 ч.

Стерилизация паром под давлением (автоклавирование) — самый эффективный бактериологической практике способ стерилизации. С его помощью быстро достигается полное и надежное обеспложивание, ведущее к гибели не только вегетативных, но и споровых форм наиболее устойчивых бацилл. Губительное действие высокой температуры обусловливается повреждением коллоидного состояния плазмы, денатурацией белка с его последующей коагуляцией, а также нарушением ферментных систем микроорганизмов. Этот способ стерилизации основан на том, что образующийся в автоклаве при кипячении воды пар не выходит наружу. а, скапливаясь в замкнутом пространстве, повышает давление. Горячий водяной пар быстро проникает в живые клетки микробов и вызывает их гибель. Действие горччего пара будет эффективнее при увеличении давления, так как в этом

случае повышается температура пара.

Стерилизация насыщенным паром под давлением проводится в автоклавах Автоклав (рис. 1) устроен по принципу парового котла и представляет собой

8. К оробка

9. Мановакуумметр

10 Манометр электроконтактный

11 Клапан предохранительный

12 Эжектор

12. Прижмим

13. Крышка

14. Кран 1/2*

15. Кран 1 /2

16. Фильтр

16 Воронка

19. Кран 1/2*

20 Вентиль пуска пара

19. Датчик уровня воды

20. Электрощит

21. Рисунок 1 - Стерилизатор паровой ВК-75-ХП Т

    Лампа сигнальная "Вода нат"

22. Лампа сигнальная *Сеть"

23. Ручка электрического выключателя (возможно это столбец неправильный в методичке х..й разберешь че написано)

массивный металлический двухстенный котел с герметически закрывающейся крышкой. Воду наливают в котел через трубку с плотно закрывающимся краном.

Уровень налитой в автоклав воды определяется по водомерному стеклу— стеклянной трубке, соединяющейся с баком, в который налита вода. Сбоку в нижней части автоклава имеется кран для слива воды после стерилизации и выпуска воздуха и пара. Автоклав подогревается электронагревательным прибором.

Образующийся при кипении воды пар проходит между стенками автоклава, через отверстия в верхней части внутренней стенки попадает во внутреннее пространство автоклава, куда помещают стерилизуемые предметы, и вытесняет воздух. При постоянном подогревании воды непрерывно образующийся пар сгущается, повышает давление внутри котла выше атмосферного. За повышением давления следят по показаниям манометра, соединенного с внутренним пространством автоклава (манометр показывает избыточное, выше атмосферного, давление). Показания манометра соответствуют следующей температуре пара в автоклаве: 0,05 МПа (0,5 кгс/см²) - 112 °С; 0,07 МПа (0,7 кгс/см²) - 115,5; 0,1 МПа (1 гс см²) - 120; 0,15 МПа (1,5 кгс/см²) - 127; 0,2 МПа (2 кгс/см²) - 134 °С.

Для проверки правильности показаний манометра в автоклав перед стерилизацией закладывают запаянные пипетки с различными веществами, имеющими определенную точку плавления, с добавлением незначительного количества какой-либо анилиновой краски в порошке. К таким веществам относятся бензонафтол (точка плавления 110 °С), антипирин (112 °С), резорцин чистый (118 I), сера (119 °С), бензойная кислота (120 °С). Запаянные трубки в вертикальном положении располагают между стерилизуемыми предметами. При достижении в автоклаве температуры плавления взятого вещества последнее расплавится и окрасится в цвет, соответствующий добавленной краске.

Во избежание разрыва от высокого давления его снабжают предохранительным клапаном, поддерживающим определенное давление. Если давление внутри автоклава поднимается выше того, на которое клапан отрегулирован, он автоматически открывается, выбрасывая излишки пара наружу (в атмосферу).

Стерилизацию материала в автоклаве чаще проводят при температуре 120 °С и давлении 0,1 МПа в течение 20...30 мин, при этом погибают вегетативные и споровые формы микробов.

В автоклаве можно стерилизовать посуду, инструменты, питательные среды к роме сывороточных, белковых и углеводных сред, МПЖ), перевязочный материал, культуры микроорганизмов, трупы лабораторных животных и т. п.

Во время работы необходимо соблюдать определенную последовательность и технические правила, обеспечивающие эффективную и безопасную эксплуатацию автоклава.

Подготовка автоклава к работе и процесс стерилизации в общем сводятся к следующему:

1. Открывают кран и наливают дистиллированную воду до тех пор, пока уровень ее не дойдет до верхней метки водомерного стекла. Затем кран перекрывают.

2. Размещают внутри автоклава стерилизуемый материал.

3. Закрывают крышку и завинчивают барашки, не допуская перекоса крышки.

4. Открывают спускной кран пароотводной трубки и начинают нагревать автоклав (открывание и закрывание кранов во время работы автоклава проводят осторожно, остерегаясь ожога паром).

5. После полного вытеснения воздуха из автоклава, что узнают по непрерывной стpye сухого пара из пароотводной трубки, спускной кран закрывают, стрелка манометра после этого начинает постепенно подниматься по циферблату. Когда она

достигнет показателя требуемого давления, нагрев автоматически отключается.

6. Предохранительный клапан предварительно устанавливают так, чтобы он начал выпускать из автоклава излишний пар сразу после того, как стрелка манометра начинает переходить черту требуемого давления.

7. С момента достижения стрелкой цифры — показателя нужного давления— продолжают стерилизацию еще 20...30 мин, после чего подогревание прекращают.

8. Когда стрелка дойдет до нулевой отметки, открывают кран пароотводной трубки и выпускают из автоклава пар.

9. Отвинчивают и открывают крышку, дают автоклаву остыть и вынимают из его простерилизованный материал.

Чтобы не обжечься остаточным паром, нужно стоять сбоку автоклава. Если кран открыть преждевременно, то стерилизуемая жидкость может вскипеть и выбросить или смочить ватные пробки, которыми закрыты стерилизуемые объекты, ставлять автоклав закрытым до полного охлаждения не рекомендуется, так как пар конденсируется и влага оседает на ватных пробках и снижает качество стерилизации.

10. Автоклав в нерабочем состоянии необходимо держать открытым, без воды в котле.

УКАЗАНИЕ МЕР БЕЗОПАСНОСТИ

1. Стерилизатор является сосудом, работающим под давлением. Во избежание аварии при работе с ним необходимо соблюдать все требования настоящего руководства и требования «Правил устройства и безопасности эксплуатации сосудов, работающих под давлением», утвержденных Госгортехнадзором России 18 -04.95г.

2. Стерилизатор соответствует требованиям электробезопасности и выполнен 1 классу 1 тип Н согласно ГОСТ 12.2-025-76.

3. К обслуживанию стерилизатора допускать лиц, прошедших специальное обучение по обслуживанию стерилизаторов.

4. Прежде чем подсоединить стерилизатор к источнику переменного тока, подключите стерилизатор и электрощит медным гибким проводом сечением не менее сечения токоведущих жил.

• в сетях с изолированной нейтралью — к контуру заземления;

• в сетях с глухозаземленной нейтралью — к контуру зануления (выполнить повторное зануление).

5. Регулярно после 4-5 циклов стерилизации при наличии давления необходимо:

а) поднимать шток предохранительного клапана для предупреждения прикипания клапана;

б) продувать водоуказательное стекло путем медленного поворота рукоятки крана 6 водоуказательной колонки, остерегаясь при этом ожогов.

6. Лицо, ответственное за исправное состояние и за безопасное действие сосуда обязано силами Медтехники периодически проверять предохранительный клапан на срабатывание. В случае неисправности производится ремонт клапана, его регулировка и опломбирование.

ЗАПРЕЩАЕТСЯ:

1) приступать к эксплуатации до тщательного ознакомления с настоящим руководством, а также до обучения обслуживающего персонала соответствующим правилам и положениям;

2) эксплуатировать стерилизатор при неисправном или неотрегулированном предохранительном клапане;

3) оставлять без присмотра стерилизатор в рабочем состоянии;

• доливать воду в стерилизатор через воронку при наличии давления в стерилизаторе;

5) открывать крышку стерилизатора при наличии давления;

6) производить ремонт частей и механизмов стерилизатора при наличии давления;

7. производить ремонт электрической части стерилизатора находящегося под напряжением;

8) эксплуатировать стерилизатор при неисправном электроконтактном манометре и мановакуумметре. а также по истечении срока их годности;

9 ) эксплуатировать стерилизатор без заземления;

10) устанавливать стерилизатор в подвальных помещениях и цокольных этажах, пол которых расположен ниже планировочной отметки более чем 0,5 метра тротуара или отмостки.