Ход работы

Наливают 15-20 мл исследуемого раствора в целлофановый ме­шочек и погружают его в стакан с дистиллированной водой таким образом, чтобы открытый край мешочка выступал над поверхностью воды. Через 1 ч с водой из стакана и раствором белка, содержащим примесь углеводов, проделывают биуретовую реакцию (на белок) и реакцию Феллинга (на глюкозу), чтобы убедиться в отсутствии белка и наличии глюкозы в воде из стакана.

Биуретовая реакция. К 5 каплям исследуемого раствора приба­вить 3 капли 10 % раствора гидроксида натрия и 1 каплю 1 % раствора сульфата меди (II), перемешать. Содержимое пробирки приобретает си­не-фиолетовый цвет, что указывает на присутствие белка в растворе.

Реакция Феллинга. К 5 каплям исследуемого раствора прибавить 5 капель феллинговой жидкости и нагреть. Наблюдается образование оксида меди (I) красного цвета (Cu₂O), что указывает на присутствие глюкозы в растворе.

Работа 6 Методы количественного определения белка на примере биуретовой реакции

Для количественного определения белков применяют физи­ческие, химические и биологические методы.

Наибольшее распространение из физических методов количе­ственного определения белков получили три: рефрактометриче­ский (по показателю преломления белковых растворов), спектрофотометрический (по поглощению в ультрафиолетовой обла­сти спектра) и полярографический (по кривым, показывающим зависимость между силой тока и напряжением, приложенным к системе, содержащей белок). Пикнометрический метод (по плот­ности белковых растворов) употребляется редко.

Химические методы количественного определения белков разнообразны. Наиболее простым химическим методом опреде­ления белка является количественное определение общего или белкового (после осаждения белка и отделения его от раство­римых азотсодержащих веществ) азота. Умножая величину процентного содержания общего азота на коэффициент 6.25 (среднее содержание азота в белках – 16 %, отсюда 100:16 = 6.25), получают данные о содержании сырого протеина. Про­делывая ту же операцию с величиной, характеризующей содер­жание белкового азота, получают данные о количестве белка. Эти способы условны, так как дают приблизительную оценку о количестве белка.

Биологические методы количественного определения белков применимы лишь к белкам, обладающим ферментативной и гормональной активностью. Измеряя степень биологической ак­тивности препарата, можно составить представление о содержа­нии в нем белка, обладающего данной активностью. Этот метод тоже не дает абсолютных результатов.

Самым распространенным химическим методом количествен­ного определения белков является колориметрический метод. Он основан на измерении интенсивности окраски цветных реакций, раз­вивающихся при взаимодействии белков с тем или иным специ­фическим реагентом. Чтобы рассчитать концент­рацию белка, в этом случае строят калибровочный график.

Биуретовый метод основан на способности растворов белка давать фиолетовое окрашивание при взаимодейст­вии с раствором сульфата меди в щелочной среде. Интен­сивность окраски пропорциональна концентрации белка в растворе.

Материал для исследования: растворы яичного белка концентрации 5, 10 и 15 мг/мл, и раствор белка неизвестной концентра­ции.

Оборудование: штативы с пробирками; бюретки для биуретового реактива; склянки с растворами белка; пи­петки на 1 мл; ФЭК с кюветами с толщиной слоя 1 см, миллиметровка.

Реактивы: биуретовый реактив.