Кислоты из дрожжей
Материалы для исследования: прессованные дрожжи.
Оборудование: ступка с пестиком, песок, центрифуга, штатив с пробирками, химический стаканчик, стеклянная палочка, лакмусовая бумага, флюороскоп, фильтр, воронка для фильтрования.
Реактивы: 1) 0.1 н и 0.005 н растворы NaOH; 2) ледяная уксусная кислота; 3) 0.4 % KMnO4; 4) 3 % раствор Н2О2.
Ход работы
В ступку помещают 10 г дрожжей, добавляют 10 мл 0.1 н раствора гидроксида натрия, 2 г песка и растирают 5 мин. Затем центрифугируют 15 мин при 3000 об./мин. Соблюдать все правила работы с центрифугой! Фильтруют. К 10 каплям над осадочной жидкости приливают 20 капель ледяной уксусной кислоты и 10 капель раствора перманганата калия так, чтобы розовое окрашивание не исчезало в течении 10 мин. Реакцию проводить в вытяжном шкафу! Через 10 мин удаляют избыток перманганата калия добавлением 4-5 капель раствора перекиси водорода и приливают 0.005 н раствор гидроксида натрия (приблизительно 5 мл) до рН 4.0 – 4.5. При ультрафиолетовом облучении фолиевой кислоты в щелочном растворе в флюороскопе наблюдается голубая флюоресценция.
Работа 11 Разделение смеси водорастворимых
Витаминов методом тонкослойной хроматографии
Материалы для исследования: раствор смеси витаминов: В1, В2, В5, В6, С в 50 % растворе этанола.
Оборудование: хроматографическая камера, силуфоловые пластинки, капилляры, УФ лампа.
Реактивы: 1) подвижная фаза 1 (бензол – этанол - уксусная кислота – ацетон, 70:20:5:5); 2) подвижная фаза 2 (бензол – этанол – уксусная кислота – ацетон, 55:35:5:5).
Ход работы
В угол силуфоловой пластинки на расстоянии 2 см от каждой стороны наносят раствор смеси витаминов. Проводят двухмерную хроматографию. Для первого направления используют подвижную фазу 1, затем подсушивают и проводят разделение в перпендикулярном направлении подвижной фазой 2. Затем пластины высушивают и выявляют пятна в УФ свете. Для выявления витаминов используют значения Rf с подвижной фазой 1: В1 – 0.00, В6 – 0.17, В2 – 0.48, В5 – 0.53, С – 0.68; с подвижной фазой 2: В1 – 0.00, В6 – 0.60, В2 – 0.16, В5 – 0.22, С – 0.44.
Работа 12 Количественное определение витамина Р (рутина) в черном и зеленом чае
Количественное определение рутина основано на его способности окисляться перманганатом калия. В качестве индикатора применяется индигокармин, который вступает в реакцию с перманганатом калия, после того как окисляется весь рутин. Экспериментально установлено, что 1 мл 0.05 н. раствора перманганата калия окисляет 3.2 мкг (0.00506 мкмоль) рутина. В черном чае содержится 300-500 мг/кг (474-790 мкмоль/кг) рутина, в зеленом – несколько больше.
Материал для исследования: различные сорта черного и зеленого чая.
Оборудование: весы, разновесы, 4 конические колбы на 50 мл, пинцет, мерный цилиндр, бюретки для титрования.
Реактивы: 1) 0,05 н. раствор KMnO4; 3) индикатор индигокармин.
Ход работы
К 0,1 г черного и зеленого чая приливают по 50 мл горячей дистиллированной воды и проводят экстрагирование (перевод одного или нескольких компонентов из твердого пористого тала в жидкую фазу с помощью избирательного растворителя) в течение 5 мин. Отмеривают в конические колбочки по 10 мл экстракта, добавляют по 10 мл дистиллированной воды и 10 капель индигокармина. Титруют раствором перманганата калия до появления устойчивой желтой окраски. Расчеты производят по формуле
(мкг(мкмоль)/кг),
где 3,2(0,00506) – количество рутина (мкг, мкмоль), соответствующее 1 мл 0,05 н. раствора перманганата калия; а – количество 0,05 н. раствора перманганата калия, израсходованное на титрование, мл; 10 – количество вытяжки, взятое для титрования, мл; 50 – общий объем экстракта, мл; 0,1 – масса сухого вещества, мг; 1000 – коэффициент пересчета на 1 кг сухого вещества.
Работа 13 Количественное определение витамина